α-Bungarotoxin, AF647，α-框架眼镜蛇毒性-阿佛拉 647 荧光标签的反应步骤

α-Bungarotoxin, AF647 的中文名称可译为 α-眼镜蛇毒素-阿佛拉 647 荧光标记，其中 α-眼镜蛇毒素（α-Bungarotoxin，简称 α-BTX）是一种小分子多肽毒素，来源于眼镜蛇毒液，能够特异性结合神经肌肉接头处的尼古丁型乙酰胆碱受体，而 AF647 表示分子已与阿佛拉 647（Alexa Fluor 647）荧光团共价偶联，提供红色荧光信号，用于蛋白标记、受体追踪或成像研究。α-Bungarotoxin, AF647 的制备通常包括荧光团活化、蛋白质偶联及纯化三步关键过程。首先，对 AF647 荧光染料进行活化处理，一般采用 NHS 酯衍生物形式，将其活性末端转化为可与蛋白氨基反应的活性酯，提高偶联效率和选择性。其次，将活化的 AF647 NHS 酯与 α-眼镜蛇毒素的赖氨酸侧链或 N 末端氨基在适宜缓冲体系中混合反应。反应条件通常为中性或弱碱性缓冲液（如 PBS，pH 7.2-7.5），温度控制在室温或低温，以维持 α-BTX 的空间构象和活性。反应过程中，AF647 的 NHS 酯与 α-BTX 氨基发生亲核攻击，形成稳定的酰胺键，实现荧光标记。偶联比例需要控制在适宜范围，以保证 α-BTX 功能的保留及荧光信号的可检测性。第三步为偶联产物的纯化，通常通过透析、凝胶过滤色谱或高效液相色谱（HPLC）去除未反应的荧光团和副产物，获得水溶性良好、活性保持完整、标记比例可控的 α-BTX-AF647。最终产物在水溶液中呈均匀红色荧光，可通过荧光光谱和吸光度测定偶联效率和标记程度。整个反应步骤设计兼顾 α-BTX 活性保留、荧光标记效率和水溶性，确保标记后的毒素在神经肌肉受体结合实验或细胞成像中仍能特异识别受体，同时提供稳定、可检测的荧光信号。α-Bungarotoxin, AF647 广泛应用于神经科学和细胞生物学研究，用于受体定位、神经元成像、受体数量分析及药物作用机制研究，其制备步骤的核心在于荧光团活化、温和偶联及高效纯化，使毒素活性与荧光标记功能兼顾，保证实验数据可靠性和重复性，是构建功能化标记蛋白和可视化研究体系的重要化学操作流程。

产品名称：α-Bungarotoxin, AF647

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