Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 荧光探针）定制合成技术

一、分子设计原理

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种种从毒伞属菌类中挨得到的七肽环肽，会 宽度特情人通过 F-Actin（纤维板状肌动蛋清），而不与的 G-Actin 通过。其现代感的通过性状使鬼笔环肽已成为 组织骨架成相、微丝动态展示实验 的很理想碳原子测试探针。CY3.5（近红外橙红荧光染剂 3.5，Cyanine 3.5）有的是种 调动可见光可见光波长约 581 nm、反射可见光可见光波长约 596–610 nm 的荧光团，饱和度高、光安全稳确定好，而且安排荧光打扰较低。与传统化 CY3 比较，CY3.5 光谱仪向红移，更比较合适深处安排三维成像。故此，Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 荧光测试探针）的来设计关键是：使用鬼笔环肽对 F-Actin 的高人格魅力；根据物理化学偶联，将 CY3.5 安全稳定拼接在鬼笔环肽的可溶性位点上；为了保证荧光团的光学元件耐腐蚀性不易受到偶联化学反应作用；集于一身 高水无水磷酸氢与生物学混溶性，可利用于稳定神经元及方面活神经元检测。 

二、定制合成技术路线

Phalloidin-CY3.5 的炼制首要包涵接下来关键步骤：配料预备鬼笔环肽（Phalloidin，≥95% 饱和度）；CY3.5 荧光团化学活化酯（CY3.5-NHS ester）或 CY3.5 马来酰亚胺（CY3.5-Maleimide）；自适应的生产有机溶液（DMSO、DMF）与保护液（PBS、碳酸盐保护液）。

活化反应
选择鬼笔环肽分子上 氨基（-NH2）或巯基（-SH） 作为偶联位点。CY3.5 的 NHS 酯与氨基发生酰胺化反应，或 CY3.5-Maleimide 与巯基进行 Michael 加成反应。

偶联反映前提改善想法室温：4–25 ℃（应对荧光团吸附）；pH 规模：7.4–8.5（切实保障胺基特异性，的同时爱护肽链组成部分）；摩尔比：Phalloidin : CY3.5 ≈ 1 : 1.2（非常合适中毒染剂可以保障仍然响应）。纯化与在线检测高效化高效液相色谱（HPLC）纯化能够得到分散化偶联结果；MALDI-TOF 质谱确保分子结构量；紫外线-可見光谱分析图和荧光光谱分析图查证电子光学特点；F-Actin 融入工作核实怪物抗逆性。 

三、关键工艺要点

控住现象位点挑选性：以免找色偶联破碎鬼笔环肽与 F-Actin 的结合在一起学习能力；守护荧光团可靠性：不起作用需阴凉开展，悬浊液中禁止超量化学活化氧；缓解液实用：实用无伯胺缓解机制（如碳酸盐缓解液），预防与 NHS 酯副现象；纯所有艺：首选反相 HPLC，自身主峰多组分，以确保单个记号；冻干与保存文档：制取后需冻干成粉，保管在 -20 ℃ 阴凉水平下。 

四、技术优势与性能

高非特异朋友：完完全全提取 Phalloidin 与 F-Actin 的组合活性酶；美好光纤激光切割机的功能：CY3.5 放出座落 596–610 nm，讯号亮度对比度高，时代背景干涉低；满足丰富成相：可与 FITC（绿光）、CY5（远红光）等荧光电极组合构成实用；生物工程混无水磷酸氢好：水无水磷酸氢强，符合固定不动组织上皮细胞复染及组成部分活组织上皮细胞透化实验英文；光稳固性好：长用时二氧化碳激光复印机扫描很容易洗白，适当共集聚与超辩别电子显微镜。 

五、应用场景

受损细胞膜骨架成相：在固定位置受损细胞膜中 F-Actin 微丝形式的荧光标记图片；活上皮细胞调查：在轻微透化条件下，改变对动态信息微丝网站的监测技术；多厚荧光成相：与 DAPI（组织组织细胞）、MitoTracker（线粒体）、CY5-Phalloidin（鬼笔环肽-CY5 电极）共同食用，达成亚组织组织细胞能力的多色成相；超辩别光学显微镜（STED、SIM）：借助 CY3.5 的光稳定的性和较长吸光度的优势，实行高辩别率的 F-Actin 三维成像；进行显像：用到厚进行切块或合理化进行中的组织细胞骨架着色。 

六、推荐合成策略或典型产品方案

Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 检测器，加固组织细胞常用）：比较适合通常免役荧光检测；Phalloidin-CY3.5 高含量冻干粉：提供数据 ≥95% HPLC 含量，是和科研管理一定量实验报告；各种方面激光散斑模块化措施：Phalloidin-CY3.5 + Phalloidin-CY5.5 + DAPI 组成，代替共焦点高倍显微镜四色激光散斑；活人体上皮细胞兼容的版本（低毒透化状况下选择）：在 PEG 保护性下增强人体上皮细胞摄食。 

产地：西安pg电子娱乐游戏app 生物

用途：科研

上述内容由渭南pg电子娱乐游戏app 生物体小编我zhn给予，仅用作科研课题  

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