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Cy5.5标记β2微球蛋白,Cy5.5-β2-microglobulin的合成及纯化过程
发布时间:2025-08-07     作者:axc   分享到:
Cy5.5标注β2微球血清,Cy5.5-β2-microglobulin的镶嵌及纯化工作β2-微球核淀粉酶酶(β2-microglobulin,β2-MG)就是种轻链血浆核淀粉酶酶,大分子量约11.8 kDa,是内重要性的天然免疫调准分子。Cy5.5标示β2-微球核淀粉酶酶的合并及纯化操作过程涉及到的高效能偶联、纯化分離和重量验测,抓实赢得构造完整性、能力化学活化的标示有机物。制作而成流程原石提前准备:高分解度β2-MG蛋清分解于加载液(如PBS,pH 8.0),保持蛋清平稳性。Cy5.5-NHS酯互溶无水DMSO中制取自给率液。偶联作用:以非常合适摩尔比(如1:2至1:5,淀粉酶:活性酶类染料)将Cy5.5-NHS酯慢慢的中滴加至β2-MG溶剂中,的体现在4℃至环境温度下慢慢的摆动,事件约2–4小时候。的体现物料pH保护在8.0控制以确保安全氨基的活性酶类。不起作用基理:Cy5.5-NHS酯与β2-MG的赖氨酸残基ε-氨基发生的亲核代替,进行保持稳定酰胺键,实行荧光标记符号。该的时候不可促使剂,经济条件一个温和,有效的避免出现球蛋白变形。反馈撤销:放入甘氨酸等氧化钙含量氨基物半封闭未化学影响的NHS酯,放到事件化学影响,稳定可靠标记图片副产物。纯化流程透析或凝胶的作用脱水:使用透析(MWCO 3-10 kDa)或抑菌凝胶净化柱(如Sephadex G-25)我们要除自由未作用颜料和小原子杂质残渣,拿到粗纯品。高效率色谱仪色谱(HPLC)纯化:进每一步应用反相HPLC(RP-HPLC)纯化,应用C18柱,梯度方向冲洗掉(乙腈-水,含少量TFA)区分标签蛋清与未标签蛋清及副物质。监测器可见光波长设为280 nm(蛋清)及675 nm(Cy5.5),认定纯品峰。纯品采集及浓缩咖啡:整理关键峰,冷冻熟食吹干到纯度更高、增强的Cy5.5-β2-MG固状生成物。的品质管控质谱探讨:核定标示原子量与原理值缝合,印证偶联成功率。UV-Vis和荧光光谱图:测试Cy5.5的代谢峰和荧光发射卫星,考评染色剂活性酶类和偶联成功率。SDS-PAGE及免疫性印记:手机验证血清完善性和标记符号症状。

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Cy5.5-β2-microglobulin

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