O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术-西安pg电子娱乐游戏app
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O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术
1. 技术背景
O-GlcNAc 为糖蛋白中常见的α-O-N-乙酰氨基葡萄糖修饰,用于研究蛋白质功能调控、信号转导、癌症与代谢疾病机制。可将O-GlcNAc定位于特定蛋白质构象或位置,以进行生化研究或靶向修饰。
2. 合成策略
化学上羟基选购性乙酰化:将最终目标球蛋白或寡肽的Ser/Thr上羟基与GlcNAc-OH合体;N-羧基碱化法:利于GlcNAc-COOH碱化为NHS酯,使其与蛋清羟基或胺基偶联;酶促体现:选用O-GlcNAc适当转移酶(OGT)在UDP-GlcNAc供体留存下做酶催化剂的效果效果。3. 合成流程
结合GlcNAc-NHSUDP-GlcNAc水脱离苦海磷碱化或物理炼制成型GlcNAc-COOH,立刻EDC/NHS碱化;核蛋白偶联不良反应在PBS抗震下(pH 7.5–8.0),GlcNAc-NHS很快填加的目标蛋清,室内温度1–2钟头;纯化透析或抑菌凝胶油烟净化器(如Sephadex G-25)洗去游离态修饰物;酶法必选OGT与UDP-GlcNAc共化学反应于20–37℃,酶浓度值及底物占比调整以控制掩盖度;鉴定会与分析方法进行Western blot(抗-O-GlcNAc抗体阳性)、MS(MALDI-TOF/LC-MS)根本修饰语的程度;顺利通过糖规格法测(如苯巴瑞蓝法)按量掩盖位点。4. 工艺节点控制
精准操纵掩盖摩尔比(1:1–1:10),避免出现过多掩盖作用蛋白酶特异性;想法降低情况(pH、温暖)保证蛋清可靠;OGT酶活抗震元件如Mg²⁺、UDP-GlcNAc有机废气浓度调优;闭光运行可解决糖的挥发。5. 应用方向
O-GlcNAc位点职能探讨与表现信号通路剖析;广泛用于PTM政策调控的淀粉酶组学分折;与抗原共轭确定靶向药物测试品台建设方案;制法抗-O-GlcNAc役苗得票数抗原。规格:mg与g级别
产地:西安pg电子娱乐游戏app 生物
用途:科研
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