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生物
荧光标记修饰蛋白质技术定制
1. 技术背景
荧光标记蛋白质在生物成像、定量检测、细胞追踪及药物递送监控中有广泛应用。通过共价键或特异性结合将荧光分子与蛋白连接,有助于实现可视化跟踪和功能分析。
2. 常用荧光染料
有机质荧光活性染料:FITC(异硫氰酸荧光素)、TRITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor 编等。荧光团淡化剂:如 NHS 酯(胺作用)、马来酰亚胺(巯基作用)、异硫氰酸酯。量子点标上:实用来长期限跟踪定位,高光粉稳定的性。3. 蛋白质反应位点
赖氨酸残基-NH₂:与NHS酯反應形成了酰胺键。半胱氨酸残基-SH:与马来酰亚胺类记号物建成硫醚键。羧基-COOH:用EDC/NHS产甲烷与荧光胺反响。位点特异形箭头:完成基因遗传规律建筑项目或那些固化的标贴引用如His-tag、Cys那些固化的标贴。4. 标记步骤
减慢液整合:如碳酸盐减慢液、PBS,pH 7.4–9.0。荧光活性染料预清理:溶解于DMSO、DMF等无水液体。化学作用与孵育:背光化学作用,普通1–3 h。删去游离子颜料:透析、凝胶的作用吸附、抽滤等的方式。标记符号率法测:用紫外光-可看得出光谱分析法(280 nm/荧光激发光谱)。5. 应用场景
BSA-FITC 蛋清追踪定位HSA-Cy5 药物剂量递送可视化管理GFP相结合血清动态化成相抗原-FITC 代替流式血细胞血细胞术(FACS)用途:科研
关于我们:
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