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荧光标记多肽定制技术(Fluorescent-labeled Peptide)
荧光标记多肽(Fluorescent-labeled Peptide)是将荧光分子共价连接至多肽结构上,实现对多肽的可视化追踪、成像、定量分析或靶向识别。此类多肽广泛应用于细胞成像、流式细胞术、荧光免疫检测、FRET能量转移等生命科学研究中。
1. 荧光染料选择
常用绿色染料:FITC、FAM、Alexa Fluor® 488、BODIPY-FL
橘红色及远红外颜料:TAMRA、Cy3、Cy5、Cy5.5、Alexa Fluor® 647近红外(NIR)染色剂:IRDye800CW、ICG、NIR797荧光对探针(用于FRET):FITC-TAMRA、Cy3-Cy5等配对系统
2. 标记方式
(1)N/C尾端标注N端与荧光有机染料NHS酯响应导致稳定的酰胺键C互联网标上需确保羧基并便用比较好偶联剂(2)侧链标志充分利用Lys、Cys等含作用基团残基采取侧链箭头最常见Maleimide的反应通过巯基标出(3)点击量电化学标志Azide–Alkyne点击率发生反应(CuAAC):比较合适在比较复杂模式中高效化接SPAAC(无铜选择):怪物友好关系、禁止铜致癌性3. 标记技术流程
1. 多肽分解中留线标记图片位点(如导入Lys或Cys)2. 多肽纯化(HPLC)后进行颜料偶联反应迟钝3. 现象必备条件管理(工作温度、pH、正比)4. 颜料标记图片融合率检查(UV融合、MS校验)5. 技能认可(荧光效果、光可靠性、上皮细胞三维成像实践)4. 应用与定制方向
人体细胞穿透力多肽符号(如FITC-TAT、FAM-R9)感觉靶向疗法多肽符号(如Cy5-RGD)两位点多色记号(双/三大染色剂记号)FRET调节器测试探针建设方案(适用于蛋白酶质–蛋白酶质主动角色判断)靶点中成药缓解压力设备可视化数据(如ICG-labeled peptide-drug conjugates)用途:科研
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