荧光标记的甘露聚糖技术简介（Fluorescently Labeled Mannan）

一、基本概述

珠露聚糖（Mannan）是一种类原因于发酵粉、草本花卉或有害菌生殖体细胞核壁的自然多糖，最主要的由珠露糖单元尺寸以α-(1→6)主链，以治α-(1→2)、α-(1→3)旁支键相连接构成的。因此其结构设计与许多免疫力性对应蛋白激酶（如巨噬生殖体细胞核珠露糖蛋白激酶、树突生殖体细胞核蛋白激酶DC-SIGN）高亲和，珠露聚糖选用于靶点递送、役苗佐剂、免疫力性设定等各方面。当珠露聚糖被荧光染色剂标记符号后（荧光珠露聚糖，Fluorescent Mannan），不只调取其靶点工作，还掌握可视化数据学习能力，也可以于体细胞摄取量激光散斑、自身地域分布探析、免役递送示踪等，也是种决定性的多工作非天然低原子核板材 

二、荧光标记方法

（1）甘露聚糖的功能修饰

原因天然水甘霖聚糖缺少同质性的发应性基团，前须导入发应基团如氨基或羧基。常见的的早期装饰办法以及：珠露聚糖氨基化（Mannan-NH₂）：经由与环氧漆丙烷胺等表现运用伯胺；甘霖聚糖羧基化（Mannan-COOH）：借助钝化或接枝聚谷氨酸带来羧基。

（2）荧光染料连接方式

荧光颜料划分为可与氨基的发应的NHS酯类，与巯基的发应的马来酰亚胺类，或经过弹框物理拼接的叠氮/炔基框架。长见拼接措施内容如下：

淡化型	荧光染色剂机构	不起作用系统
NHS酯类	FITC-NHS，AF488-NHS	与氨基形成了酰胺键
马来酰亚胺类	Cy5-MAL, Cy7-MAL	与巯基演变成硫醚键
炔基-叠氮	DBCO-Cy5、Cy7-N₃	Click体现（铜或无铜打开网页）

（3）荧光标记示意流程

将Mannan融掉于PBS或碳酸抗震液中；慢慢的加入适量荧光染色剂-NHS或Cy5-MAL，管控pH在7.5~8.5；想法1–2每小时后透析清除分散活性染料；产品冷冻冰箱太干或储存在阴凉先决条件下。

 

三、常用荧光染料

活性染料明称	散发激发光谱	实用检查	情况说明
FITC（异硫氰酸荧光素）	520 nm	脉冲光共集焦、流式的组织细胞术	通用于绿化标志，生产费用少
Alexa Fluor 488	520 nm	遮暇比较稳定义，较FITC强
Cy3/Cy5	570/670 nm	人体细胞成相、共焦聚	显眼的桔朱红色/远桔朱红色荧光
Cy7、ICG	780–800 nm	活体近红外三维成像	机构刺穿强，可代替于身体内示踪
pHrodo	pH铭感染色剂	酸碱性室内环境荧光激发	适宜溶酶体追查

 

四、技术优势

靶向治疗免疫肿瘤受损细胞膜肿瘤受损细胞膜：甘霖聚糖可被树突肿瘤受损细胞膜、巨噬肿瘤受损细胞膜等吞灭，荧光标出适用于探测其摄入效果。生物技术相溶性好：先天收入，低抗体毒副作用，合适使用在爬行动物测试与活体的研究。可应用于多渠道：可淡化脂质体、奈米粒、蛋白质、核酸等各种各样质粒载体，实现目标性能化递送。化学发光法力量强：荧光难度与聚糖量相关内容，可化学发光法了解摄入与地域分布。替换种成相主设备：支撑流式的血细胞术、共集中、活体成相机系统（IVIS）等。 

五、应用方向

（1）免疫抗体组织细胞靶点递送论述甘霖聚糖能紧密联系CD206蛋白激酶（甘霖糖蛋白激酶），靶点巨噬体细胞系、DC体细胞系；荧光标记图片后可追踪递送操作过程，分析评估胞吞学习效率、胞内位置精准定位（如溶酶体共位置精准定位）。（2）肺炎疫苗佐剂与抗原递送软件系统荧光杨枝聚糖可掩盖脂质体、PLGA等递送操作系统，将抗原球蛋白共载；web3d狂犬疫苗走进APC（抗原呈递癌细胞）的动态数据方式。（3）活体规划及示踪三维成像NIR染色剂（如Cy7、ICG）标上杨枝聚糖能作于小鼠身体内部荧光三维成像，研发聚糖在肺部肿瘤、淋巴腺结、脾脏等的靠积蓄症状；用作于疾病连接示踪。（4）聚糖自动识别制度研究分析合理利用有差异 格局珠露聚糖荧光电极，科学探究与CLRs（C型凝集素蛋白激酶）等糖鉴别蛋白激酶的融入机制化；可捕助挑选靶向药物配体设计网站优化。

六、相关试剂推荐

货商品名稱称	概括原因分析
FITC-Mannan	FITC标签的杨枝聚糖，适宜于細胞激光散斑、免疫抗体监视
Cy5-Mannan	远桔红色标签杨枝聚糖，是和细胞层显像
Mannan-NH₂	氨基化珠露聚糖，供后期的标记符号操作
Mannan-DBCO	炔基甘霖聚糖，适用于弹框生物学荧光标记图片
DSPE-PEG-Mannan	脂质装饰珠露聚糖，能用于脂质身体表面面装饰
ICG-Mannan	近红外图标甘霖聚糖，适当IVIS小动植物成相

七、储存与使用注意事项

荧光标出甘霖聚糖应闭光保留（4°C或−20°C），解决办法光固色；动用前充分的融解，推荐英文高沸点溶剂：PBS、H2O或DMSO摇匀；荧光走势测量需切换提高与放出吸光度；荧光标注后应验测标注成功率（吸光度法、HPLC或荧光光谱阐述阐述）；若适用身体实验所，介绍用黄毒活性染色剂（如ICG、Cy7）且参与纯化洗去散布活性染色剂。