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生物
荧光标记氨基酸定制技术
一、概述
氨基酸的荧光标记广泛应用于蛋白质动态追踪、代谢示踪、酶活分析、信号路径研究等。通过对天然氨基酸或其衍生物进行荧光修饰,可构建荧光探针、标记底物或模拟肽链。
二、定制技术流程
1. 有机酸前体决定绿色有机酸如:Lys(有–NH₂)、Cys(有–SH)、Asp/Glu(有–COOH)ip产业化有机酸(Fmoc-AAs、Boc-AAs等)2. 荧光染色剂与连结方试FITC → 作用Lys上的–NH₂NHS-Rhodamine/Cy5 → 胺基偶联Maleimide类荧光颜料 → 与Cys-SH化学反应EDC/NHS法 → 使用于氨基与羧基之間的偶联3. 症状先决条件水或DMF标准体系症状pH把控在 7.4–8.5 期间体现時间:1~12一小时,遮光4. 纯化与分折纯化模式:透析、HPLC、层析介绍方案:MALDI-TOF、荧光光谱图、NMR、MS三、应用
荧光有机酸用做自身细胞代谢示踪荧光核苷酸遮盖多肽共建FRET测试探针淀粉酶质定位装饰或活性酶类论文检测四、推荐试剂
| 微生物培养基 | 用途 |
| FITC、NHS-Cy5 | 主流的荧光标示物 |
| L-Lysine、Cys、Fmoc-Lys(Boc)-OH | 普遍胺基酸底物 |
| DMF、HEPES | 相转移催化剂系统 |
| EDC、NHS | 酰胺键离子液体剂 |

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