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荧光标记氨基酸定制技术-西安pg电子娱乐游戏app 生物
发布时间:2025-07-04     作者:zhn   分享到:

荧光标记氨基酸定制技术

一、概述

氨基酸的荧光标记广泛应用于蛋白质动态追踪、代谢示踪、酶活分析、信号路径研究等。通过对天然氨基酸或其衍生物进行荧光修饰,可构建荧光探针、标记底物或模拟肽链。


二、定制技术流程

1. 蛋白质前体采用天然的碳水化合物如:Lys(有–NH₂)、Cys(有–SH)、Asp/Glu(有–COOH)衍化化酪氨酸(Fmoc-AAs、Boc-AAs等)2. 荧光活性染料与联接办法FITC → 的反应Lys上的–NH₂NHS-Rhodamine/Cy5 → 胺基偶联Maleimide类荧光有机染料 → 与Cys-SH的反应EDC/NHS法 → 适用于氨基与羧基相互间的偶联3. 不良反应先决条件水或DMF模式现象pH控住在 7.4–8.5 中的反应时长:1~12小时左右,闭光4. 纯化与阐述纯化的方式:透析、HPLC、层析概述方式方法:MALDI-TOF、荧光光谱仪、NMR、MS


三、应用

荧光酪氨酸代替体内的新陈代谢示踪荧光胺基酸表达多肽建立FRET探头脂肪酸质方向遮盖或抗逆性检验


四、推荐试剂

采血管基本功能
FITC、NHS-Cy5主要荧光标注物
L-Lysine、Cys、Fmoc-Lys(Boc)-OH最常用胺基酸底物
DMF、HEPES相转移催化剂装修标准
EDC、NHS酰胺键促使剂
 

荧光标记氨基酸定制技术

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