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荧光标记氨基酸定制技术
一、概述
氨基酸的荧光标记广泛应用于蛋白质动态追踪、代谢示踪、酶活分析、信号路径研究等。通过对天然氨基酸或其衍生物进行荧光修饰,可构建荧光探针、标记底物或模拟肽链。
二、定制技术流程
1. 蛋白质前体采用天然的碳水化合物如:Lys(有–NH₂)、Cys(有–SH)、Asp/Glu(有–COOH)衍化化酪氨酸(Fmoc-AAs、Boc-AAs等)2. 荧光活性染料与联接办法FITC → 的反应Lys上的–NH₂NHS-Rhodamine/Cy5 → 胺基偶联Maleimide类荧光有机染料 → 与Cys-SH的反应EDC/NHS法 → 适用于氨基与羧基相互间的偶联3. 不良反应先决条件水或DMF模式现象pH控住在 7.4–8.5 中的反应时长:1~12小时左右,闭光4. 纯化与阐述纯化的方式:透析、HPLC、层析概述方式方法:MALDI-TOF、荧光光谱仪、NMR、MS三、应用
荧光酪氨酸代替体内的新陈代谢示踪荧光胺基酸表达多肽建立FRET探头脂肪酸质方向遮盖或抗逆性检验四、推荐试剂
采血管 | 基本功能 |
FITC、NHS-Cy5 | 主要荧光标注物 |
L-Lysine、Cys、Fmoc-Lys(Boc)-OH | 最常用胺基酸底物 |
DMF、HEPES | 相转移催化剂装修标准 |
EDC、NHS | 酰胺键促使剂 |
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