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抗体的荧光标记之异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体的方法介绍
发布时间:2020-09-16     作者:zhn   分享到:
什么呢是免疫抗体荧光标记符号?

将特异形表面抗原与荧光色斑采用化学上的方式整合出来,只能实现荧光表面抗原。这个荧光表面抗原与相对应的的抗原整合,造成荧光标上表面抗原-抗原混合物,再采用相关的测量仪器检查荧光,可以抗衡原表面抗原通过示踪检查。现阶段,荧光表面抗原因为其高灵活度、高特异形、易实操性被大面积使用于抗体印迹细胞核仪、酶联抗体吸出、血清烙印、原位杂交种、荧光显像等检查中。

荧光素:要呈现显著的荧光并能作染剂便用的无机单质叫作荧光素或荧光染剂。符合于标志核蛋白的荧光色素沉着首要有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC),四乙基罗达明(rho-damine B200,RB200)和四甲基异硫氰基罗达明(tetramethyl rhodamine isotheynate,TMRITC)。实计上现下APP十分多的只能异硫氰酸荧光素那种。

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上边他们就以异硫氰酸荧光素(FITC)加以分析,概诉简介一下子抗体阳性的荧光素标识的方法。

1.基本原理

多个脂肪酸质外层包含较多的赖氨酸残基,许多赖氨酸残基的有着ε-氨基可与FITC共价结合在一起在一起。与FITC结合在一起在一起的抗体阳性可为特情人的电极,以检测人体细胞响应抗原的有着。FITC兼备很高的量子产能(发光与吸收率光的指数值为0 .85),又很达成的偶联物的平衡性不错,FITC是现下app十分广的荧光颜料。在pH 9.8必备条件下,赖氨酸残基的分离ε-氨基与FITC造成的亲核影响,因此产生硫脲连到。


2.标记方法

异硫氰酸荧光素常用的箭头法有左右两种类型:

1)搅匀法(非常适合大合格品)

  • 取相应量的纯化后的IgG稀硫酸,用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐降低液希释至20 mg/mL。

  • 按荧光素与免疫抗体比1︰20~1︰100(常见用1︰100)称取异硫氰酸荧光素,用pH9.8碳酸盐减慢液溶解度。

  • 将IgG稀硫酸处于涡流打料器上,开启触点开关,用适当的力度轻轻打料,以不会起沫起算。逐滴入入荧光素液(约10min~15min加完)。工作操作过程中,都能够检测法打料液的pH值,若底于9.0,则应以碳酸钠稀硫酸调整。置4 ℃打料6 h~12 h就可以了。

2)透析法(非常适合样品品)

  • IgG稀硫酸用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐抗震液掺水成1%渗透压,装进去透析袋中。

  • 将荧光素配置成0.1 mg/mL,其量为1%免疫抗体水溶液的10倍,放到烧杯里。

  • 将透析袋居于烧杯杯,释放电能磁混合器器上4 ℃混合器24既能。

透析法的独到之处是标注图片不光滑,非特男人荧光少,但所标注图片的时间段长,荧光素的使用量多,约比搅拌机法多10倍。


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