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绿色荧光素标记牛血清白蛋白BSA-FITC合成详细步骤
发布时间:2020-08-25     作者:Harry   分享到:

黄绿色荧光标出牛血纯洁核淀粉酶的技术应该参阅荧光标出表面抗原的技术,如果表面抗原也就是种核淀粉酶,实际技术下列:


工作涂料:


1、异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)异构体I(IsomerI),M.W:389.4发送光谱图仪(代谢光谱图仪)493nm,荧光光谱分析550nm

2、牛血纯洁淀粉酶(BSA),M.W:68000,纯净度98%。(AlbuminBovineSerum)

3、标识响应液:0.5MpH9.5C.B,冲洗掉液:0.01MpH7.2PBS


标签流程步骤:


1:将待交连的核蛋白(溶度³1mg/ml)对交连发应液透析2次4 ℃,至pH=9.0。交连发应液调制工艺:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加入水定容至1 L。

2:将FITC混溶DMSO中,含量为1mg/ml。每天热塑运用的FITC均应清爽标定,遮光。

3:按P:F(血清质:FITC)=1mg:150μg 的身材比例将FITC速度慢加进于抗原水溶液中,边加边轻抚幌动使其与抗原混合型喂养匀称,暗处4 ℃反應8 hr。

4:参加5mol/L的NH4Cl至终酸度50mmol/L, 4 ℃解除不良反应2 hr。

5:将热塑物在PBS中透析两次往上,至透析液清亮。

6:化学交联物的检验F/P比重:  ,该值应处于2.5 ~ 6.5两者。

7:FITC化学交联的血清应放至pH7.4的磷酸降低液中,建立0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗处存储。