Streptavidin,Alexa Fluor 546 conjugate的合成策略
货命名称:Streptavidin,Alexa Fluor 546 conjugate的镶嵌方法一、核心区结构类型与化工主成链霉亲和素(Streptavidin):來出于链细菌(Streptomyces avidinii)的四聚体淀粉酶,碳原子量约53-60 kDa,由十二个同等亚基根据,任何亚基含159个碳水化合物,演变成β-桶状框架。每种亚基可特情人构建另一个生物技术制品素原子核,四聚体共可构建四位生物技术制品素原子核,养成高比较稳明确符合物(解离常数Kd≈10⁻¹⁴ M)。Alexa Fluor 546 荧光纺织染料:橙红荧光纺织染料,增加光谱556 nm,放出光谱573 nm,荧光量子产出率高,光安全的性强,pH不过敏(pH 4-10范围内内荧光程度安全的)。生物材质:隶属于磺化罗丹明具象化物,凭借NHS酯与链霉亲和素的氨基(如赖氨酸残基)共价偶联,转变成不稳定性的酰胺键。偶结合构:实现电学化学交联剂(如NHS酯)将Alexa Fluor 546共价接连到链霉亲和素表面层氨基上,构成Streptavidin-Alexa Fluor 546 Conjugate,具备高人格魅力与荧光预警变大技能。二、自动合成方法与重点调整参数值炼制管理策略:NHS酯偶联法:Alexa Fluor 546的NHS酯与链霉亲和素的氨基在碱条件(pH 6.5-7.5)下的化学反应,建成酰胺键。的化学反应气温25-37℃,准确时间4-24一小时,需闭光处理荧光淬灭。纯化方法流程:透析(公款私存原子核量3.5-10 kDa)、C18反相HPLC等度冲洗掉或大小排阻色谱(SEC)避开未影响染色剂和沉淀物,溶解度≥95%。关键性管理技术参数:pH调节作用:碱化时候中,(如EDC/NHS碱化)pH 4.5-6.0,偶联时候中,pH 6.5-7.5,动平衡机羧基碱化与氨基活力性。摩尔比系统优化:活性染料与血清摩尔比1:1至10:1,保证偶联热效率与此同时抹去怪物素整合程度。稀释剂指标体系:水相(PBS、生理上氯化钠)或正负极可挥发稀释剂(DMSO、DMF),无水条件使用于EDC/NHS产甲烷。



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