Streptavidin,AF700 conjugate，链霉亲和素-AF700偶联物的合成路线

链霉亲和素-AF700偶联物（Streptavidin, AF700 Conjugate）是一种将链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料AF700（Alexa Fluor 700）通过化学偶联方法合成的复合物。该复合物常用于分子标记、免疫分析、荧光成像和细胞追踪等生物医学领域。AF700作为一种近红外荧光染料，具有较长的激发和发射波长（通常在 690-710 nm 范围内），适合用于多重标记和多色成像实验，尤其在深部组织成像和小动物体内成像中表现出色。

炼制风格分解成链霉亲和素-AF700偶联物的重要工作步骤比如链霉亲和素和AF700染剂直接的有机化学偶联化学反应。以下的是该塑料物常常用的分解成工艺流程，运用了链霉亲和素与AF700染剂的共价连接方式。

1. 链霉亲和素的准备

先，想要的准备链霉亲和素稀硫酸。链霉亲和素普通是由Streptomyces avidinii菌株中分离纯化的四聚体蛋白质。链霉亲和素的原子量约为60 kDa，每家原子能与一名生物技术素原子特情人组合。只为确定偶联反应迟钝的顺利圆满展开，链霉亲和素想要在应适当的储存液中展开稀释溶液，普通运用磷酸储存液（PBS）或HEPES储存液，切实保障pH值在7.4时间。

2. AF700荧光染料的活化

AF700染剂一般是以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯的表现形式供给，享有其中一个活性酶酯基团，还可以与链霉亲和素单单从表面的氨基基团（如赖氨酸残基上的氨基）发现作用，养成不稳定性的共价键。一开始，需提前安排AF700染剂的水饱和溶液，一般是选用DMSO或水将其溶解完至需用渗透压。AF700的水饱和溶液怎样在冰里提前安排，以杜绝染剂的生物降解。将AF700颜料悬浊液申请加入含链霉亲和素的悬浊液中，并提高发应在4°C下开始。上述环节想要安全教案小班操纵颜料与链霉亲和素的摩尔比，一般而言是1:1也许有点大量的颜料，以以保证发应的极有效率性和偶联物的型成。

3. 偶联反应的进行

在高低温具体条件下（大多数为4°C），将AF700颜料NHS酯与链霉亲和素溶剂混合法，并在1-2半小时内做想法。想法过程中中，AF700的NHS酯基团会与链霉亲和素原子核中的氨基（如赖氨酸上的氨基）发生了亲核想法，转为实现稳定的共价偶联物。想法时，pH值大多数要求实现在7.4-8.0，以升级优化想法带宽和偶联吸收率。这时，链霉亲和素的界面上的氨基与AF700有机活性染料的灵活性酯基团生理反应，行成链霉亲和素-AF700的共价接触。每项链霉亲和素氧分子结构能够偶联多种AF700有机活性染料氧分子结构，延长荧光刚度。

4. 未反应染料的去除

不良响应完整后，在选用透析或妇科抑菌凝胶筛选的做法彻底清除未不良响应的AF700染剂。要为彻底清除分低子量的自由染剂，也可以对其进行透析（在选用尽量钻孔大小的透析袋，平常为10-30 kDa）将偶联物与未不良响应的染剂分手，或在选用妇科抑菌凝胶筛选柱（如Sephadex G-25）对偶联物对其进行冲洗掉。平常透析阶段会延续一些每小时，有一天水溶液中是没有未不良响应的染剂。除掉解离颜料后，就能够使用紫外光-明显可见的吸光光谱仪仪（UV-Vis）或荧光光谱仪仪侧量验收偶联物的含量和荧光抗弯强度。AF700颜料的获取峰大致需要在690 nm左右，发射点峰则显示在710 nm左右。

5. 确认偶联效果与纯度

顺利使用SDS-PAGE（高密度聚乙烯酰胺妇科凝胶电泳）可不不错进步讲解链霉亲和素与AF700染剂的偶联成果。SDS-PAGE够显现偶联生理反应要不要基本采取，并确实偶联物的分子结构量变化。还有，偶联物的荧光抗弯强度可不不错顺利使用荧光分光光度计或机光复印机扫描荧光仪采取酶联免疫法讲解，为了确保偶联物的荧光性能特点积极。

产品名称：链霉亲和素-AF700偶联物

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