Streptavidin,Cy3 conjugate， 链霉亲和素-Cy3偶联物的制备方法

链霉亲和素-Cy3偶联物（Streptavidin, Cy3 Conjugate）是一种由链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料Cy3通过化学方法偶联形成的复合物。Cy3是一种广泛用于生物学研究的有机荧光染料，具有橙红色的发射光谱。链霉亲和素是与生物素结合能力极强的蛋白质，广泛应用于生物标记、免疫检测和分子探针研究。通过将Cy3与链霉亲和素结合，产生的复合物具有高特异性、灵敏度以及可视化功能，广泛应用于荧光成像、免疫分析、分子探针等领域。

制作的方法制取链霉亲和素-Cy3偶联物的通常步聚收录链霉亲和素与Cy3染色剂的耐腐蚀偶联不良反应。下是一种一样制取注意事项，大概状况和步聚概率会表明实验所标准和所选用的制剂有了的不同。1. 资料做准备

• 链霉亲和素（Streptavidin）：进行企业化的链霉亲和素，基本上是由Streptomyces avidinii中分离纯化的四聚体蛋白酶。应进行未过程每掩盖的链霉亲和素，以确保安全其与动物素的联系性能不在不良影响。
• Cy3荧光活性活性染料：Cy3（或Cy3.5）就是种使用的荧光活性活性染料，具有着充分调动光激发光谱约为550 nm，释放激发光谱约为570 nm。Cy3一般来说以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯表现形式能提供，方便简洁与链霉亲和素上的氨基反应迟钝。
• 响应液：PBS响应液（磷酸二氢钠响应生理盐水）广泛用于稀释液链霉亲和素及Cy3染剂。常适用pH临界值7.4的PBS。
• 2. Cy3纺织染料产甲烷

Cy3染色剂以NHS酯（N-Hydroxysuccinimide ester）组织方式的存在，在这种酯化组织方式能与链霉亲和素表面层露出的氨基（-NH2）再次发生亲核反响，出现共价偶联。关键在于，需要将Cy3染色剂在适量的萃取剂（如DMSO或水）中溶解度并稀释溶液至的需求氧浓度。运用PBS储存液将Cy3染色剂对其实现滋养，平常在0-4°C下对其实现反响，以规避过快的反响效率。3. 链霉亲和素的预进行处理在偶联生理的反应前，链霉亲和素还要经历过尽量的前处理。基本便用PBS或别尽量的减慢液（如HEPES减慢液）对链霉亲和素使用配制，以有效确保其在生理的反应过程中 中的动态平衡性和化学活化。如链霉亲和素中具有刺激性杂质残渣或未彻底融化的蛋清，应该使用透析或抽滤过滤系统弄掉不无水磷酸氢成分。4. 链霉亲和素与Cy3偶联反响将Cy3有机活性染料的NHS酯成为到链霉亲和素盐溶液中，遵照需的摩尔比去症状。基本上，Cy3有机活性染料与链霉亲和素的摩尔比是1:1或跟据实验性需要量懂得调整。症状基本上在4°C下去，以及症状日期会装置为1-2小时左右，以以保证彻底偶联。症状的时候中，Cy3的NHS酯组成部分会与链霉亲和素表皮氨基（如赖氨酸残基上的氨基）确立症状，确立不稳定性的共价融入。5. 的还原未症状的Cy3颜料不良现象提交后，用透析或疑胶进行吸附清洁的做法出掉未不良现象的Cy3纺织染剂和同一小团伙钙镁离子。透析用更适合尺寸大小的膜（如团伙量锯开为10-30 kDa的透析膜），一般 透析全过程会坚持这些几小时，也许有一天水溶液中不再遇见未配合的Cy3纺织染剂。若用疑胶进行吸附清洁柱，可以用日常的疑胶进行吸附清洁媒质（如Sephadex G-25），借助洗刷来出掉不要的团伙。6. 认定偶联物的色度与质量完成太阳光的紫外线-内见光谱仪浅析（UV-Vis）或荧光光谱仪浅析法证实链霉亲和素-Cy3偶联物的密度和饱和度。Cy3的吸纳峰要花费在550 nm处，发射卫星峰则存在在570 nm随近。会完成測量偶联货物的吸光度和荧光硬度来测试偶联质量。若果实用SDS-PAGE凝露浅析，也会测试链霉亲和素的团伙量变化，证实偶联的反应有没成就。

产品名称：链霉亲和素-Cy3偶联物

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