CY5-磷酸吡哆醛，CY5-PLP的提炼方法综述磷酸吡哆醛（Pyridoxal Phosphate, PLP）是维B6的渗透性风格，就是种含带磷酸基、醛基和吡啶环的生物学技术小原子核。PLP在生物学技术制度中作为主酶直接参与核苷酸基础代谢、转氨响应和某些酶催化剂的作用响应。其结构设计特征描述涵盖吡啶环、4’-磷酸基和醛基，醛基可与氨基形成了Schiff碱，为物理偶联能提供响应位点。

CY5-PLP是一种功能化荧光分子，将近红外荧光染料CY5与PLP偶联形成的衍生物。CY5染料属于类瑜珈染料（cyanine dyes）家族，具有长共轭碳链结构，吸收峰约在675–680 nm，发射峰约695–710 nm，具有高强度、稳定的近红外荧光信号。通过将CY5染料与PLP偶联，可以同时实现光学追踪和化学反应功能，使其在蛋白质标记、酶活性分析及分子探针开发中具有广泛应用价值。

镶嵌方法流程慨述

1. 主要原料準備
• CY5颜料一般以最末端羧基（CY5-COOH）或活性酯（如CY5-NHS）方式能提供，切实保障能与PLP的氨基或醛基症状。
• PLP以磷酸吡哆醛形态具有，含亲水性醛基和磷酸基，需到水或减慢风险管理体系中平衡具有，逃避自行聚合物或可降解。
2. 响应思路选定
• 偶联原则包括应用于PLP醛基的Schiff碱进行不起作用。
• CY5-NH2可与PLP醛基在轻度咸性或中性化环境签发生缩合，产生亚胺键（Schiff碱）。
• 若要加强偶联可靠性，能致用复原剂（如NaBH₄或NaCNBH₃）将亚胺键复原为可靠的二级考试胺。
3. 偶联响应要求
• 高沸点溶剂：平常选取保护液（如PBS或磷酸保护液）降解PLP和CY5ip产业物，确保水阴离子型和体现匀。
• pH條件：碱式盐或略微咸性（pH 6.5–7.5）影响于亚胺键生成，也以防PLP挥发。
• 溫度与时候：高温标准下发应数个钟头至留宿，切实保障偶联质量此外守护颜料和PLP的电子光学及物理化学耐腐蚀性。
4. 偶联反映步驟综述
1. 将CY5-NH2融解于适合响应液中。
2. 将PLP融化并速度慢填加CY5-NH2悬浊液。
3. 在平稳情况下搅拌机，从而促使醛基与氨基导致亚胺键。
4. 如要要激发保持稳相关性，要加入极富替换系统剂，将Schiff碱替换系统为保持相对稳定二次胺。
5. 纯化布骤
• 偶联反映迟钝后混杂物包含有未反映迟钝的CY5-NH2、未反映迟钝PLP及偶联副产物。
• 可主要包括透析、凝露滤出或反相高效率的液质色谱（RP-HPLC）分割纯化。
• HPLC纯化配合太阳光的紫外线-由此可见和荧光测试，回收对象物品，除掉副物品。
6. 研究方法步骤方法步骤
• 紫外光-内见光谱图（UV-Vis）：检查CY5汲取峰，明确有机染料关键未受伤害。
• 荧光光谱图：分析发峰地位和的强度，风险评估荧光耐热性控制实际情况。
• 质谱（MS）：验收偶联原子核量及饱和度。
• 核磁震动（NMR）：认可亚胺键或重置后的一级胺构成及偶联部位。

产品名称：CY5-PLP

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