AF633 C5 Maleimide,AF633 C5 马来酰亚胺的反应步骤
AF633 C5 Maleimide,AF633 C5 马来酰亚胺的生理反应过程
AF633 C5 马来酰亚胺结构中含有一个马来酰亚胺官能团和一个 C5 碳链连接臂。马来酰亚胺可选择性地与自由巯基(-SH)反应,例如蛋白质或多肽中的半胱氨酸残基。在略偏碱性条件下(通常 pH 6.5–7.5),巯基以硫负离子形式存在,对马来酰亚胺的 α,β-不饱和酮发起亲核攻击,形成稳定的硫醚键,实现染料与靶分子的共价结合。C5 碳链提供了一定的空间灵活性,使染料结合后不易干扰蛋白质构象或活性位点。
典型的的发应步奏有以下:- 盐溶液筹备 :将 AF633 C5 马来酰亚胺产出液析出于非常干燥 DMSO 或 DMF 中,大部分溶度为 1–5 mM,阴凉永久保存。产出液应避免出现油分,防止蛋白质水解出现活力缩减。
- 血清质或多肽筹备:待标注的血清或多肽水解在保护液中,保护液应不标巯基打扰物(如 DTT、β-巯基乙酸乙酯等),惯用 PBS、Hepes 或碳酸盐保护液,pH 掌握在 6.5–7.5。血清渗透压通常在 1–10 mg/mL。
- 反应迟钝混和:将储备量液稀释溶解至恰当工做渗透压,与淀粉酶液体按摩推油尔比假如,长用摩尔比空间为 1:1 至 5:1(染剂:淀粉酶)。混和后轻柔地搞反或旋轉混匀,防止出现心跳加快振荡器以可以减少淀粉酶转性。
- 反馈经济条件:在空调温度或 4℃ 下背光孵育 30–120 分种。反馈期限表明蛋白质巯基础量和反馈生产率修整,提高认识以便充分的标记图片而不神经太过紧绷掩盖。
- 撤销反响:反响开始和结束后,可利用下载低质量浓度巯基有机物(如 L-半胱氨酸或谷胱甘肽)或马上采取纯化来撤销未反响的染剂。
- 乙酰乙酸纯化:经常用方法步骤包含透析、疑胶过滤水(如 Sephadex G-25)或离心力滤器除去存在有机染料。纯化后可荣获可靠、均一的 AF633 标记符号淀粉酶或多肽。



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