Cy3 Tyramide，Cy3荧光团偶联酚胺的有机化学特点

Cy3 Tyramide 是一种结合 Cyanine 3（Cy3）荧光团 与 Tyramide（酚胺） 的功能化衍生物，用于荧光信号增强和蛋白质标记实验。Cy3 荧光团激发波长约为550 nm，发射波长约为570 nm，提供明亮的橙红色荧光。Tyramide 结构中的酚羟基在过氧化物酶（如 HRP）催化下可氧化为自由基，并与蛋白质或组织中的酪氨酸残基共价结合，实现信号放大（Tyramide Signal Amplification, TSA）。Cy3 Tyramide 因其高光稳定性和特异性偶联能力，在免疫组织化学、免疫荧光成像及单细胞分析中具有广泛应用。

一、生物因素

1. 荧光核心
   Cy3 由共轭吲哚结构形成连续 π 电子体系，保证高量子产率和光稳定性。其窄发射光谱便于多通道实验中与其他荧光染料兼容。

2. Tyramide 功能化
   Tyramide 末端含酚羟基和胺基，能够在 HRP 或类似酶催化下生成自由基，快速与蛋白质酪氨酸残基共价结合。通过 Cy3 与 Tyramide 共价连接形成 Conjugate，可同时实现荧光标记与酶催化结合功能。

3. 结构特点
   Cy3 Tyramide 通常由荧光团、柔性连接器和 Tyramide 末端组成。连接器提供空间灵活性，使酶催化反应和荧光信号互不干扰，同时保持分子稳定性。

二、生成时候Cy3 Tyramide 的镶嵌普遍构成下工作步骤：

1. Cy3 荧光团活化
   将 Cy3 转化为可反应形式，如 NHS 酯或异硫氰酸酯。活化通常在干燥有机溶剂（如 DMSO、DMF）中进行，以防止水解和副反应生成。

2. Tyramide 衍生物准备
   为避免酚羟基或胺基在偶联过程中发生非特异性反应，常对 Tyramide 进行保护，如使用 Boc 或 Fmoc 保护胺基。保护后的 Tyramide 可与活化 Cy3 中间体进行反应。

3. 偶联反应
   Cy3 活性中间体与保护的 Tyramide 在室温下发生共价偶联，形成稳定的 Cy3-Tyramide 分子。偶联反应通常在干燥条件下进行，以确保反应效率和分子完整性。

4. 去保护
   偶联完成后，通过酸性或碱性条件去除保护基，暴露 Tyramide 的酚羟基和胺基，使其具备在 HRP 催化下的活性。去保护条件需温和，以避免荧光团降解。

三、纯化操作过程

1. 柱层析
   使用硅胶柱或反相柱对偶联产物进行分离，去除未反应的 Cy3、Tyramide 以及副产物。

2. 高效液相色谱（HPLC）
   HPLC 是纯化 Cy3 Tyramide 的常用方法，可通过梯度洗脱获得高纯度产物，保证荧光性能和标记特异性。

3. 验证与表征
   纯化后的 Cy3 Tyramide 可通过质谱（MS）、核磁共振（NMR）及荧光光谱验证其分子结构和光学特性，确保末端酚羟基活性可用且荧光信号稳定。

四、广泛应用优势与劣势

• 网络表现调大：在 TSA 实验设计中，Cy3 Tyramide 可被 HRP 催化氧化出现自主基，很快标记图片核蛋白质含量，完成网络表现调大。
• 高特情人：偶联体现专注，自动生成稳定可靠共价键，避免出现非特情人构建。
• 多绿色通道兼容：红红色荧光与 DAPI、FITC 等别荧光活性染料兼容，可完成多标上激光散斑。
• 光不稳性好：非常适合长期段影像及蒙题辨率高倍显微镜仔细观察。

产品名称：Cy3 Tyramide 

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