AT 590 Succinimidyl Ester,CAS号:670269-33-7,反应机理
AT 590 Succinimidyl Ester,CAS号:670269-33-7,响应原理
AT 590 Succinimidyl Ester(CAS号670269-33-7)是一种功能性荧光标记试剂,由AT 590荧光核心和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯官能团组成。AT 590是一种橙红色荧光染料,激发峰约为590纳米,发射峰约为610纳米,具有高量子产率、亮度高和光稳定性良好的特点。NHS酯末端为分子提供高度选择性的化学活性,可在温和条件下与伯胺(–NH₂)官能团发生共价结合,生成稳定的酰胺键,从而实现蛋白质、多肽、抗体及其他含氨基生物大分子的标记。AT 590 Succinimidyl Ester的结构通常包括荧光核心、活性酯末端以及可能的亲水性取代基,以提高水溶性和在生物体系中的分散性。
响应生理机制AT 590 Succinimidyl Ester的反响差向异构其主要鉴于NHS酯与伯胺的亲核加持-抗衡反响。在最佳经济条件下,NHS酯都是种位置活泼可爱的羧酸发展物,其酰基碳原子核包含一些正电荷量,使其易受亲核微生物培养基恶意攻击。实际的反响期间属于这部骤:亲核进攻
伯胺分子中的氮原子具有孤对电子,能够对NHS酯碳原子进行亲核攻击。在反应开始阶段,伯胺的氮原子攻击酰基碳,形成一个四面体反应中间体。此步骤是反应的速控步骤,反应速率受pH和溶剂极性影响。通常在中性或弱碱性缓冲液(pH 7.0–8.5)中进行,以保证伯胺的亲核性最大化,同时维持NHS酯的稳定性。离去基脱离
在四面体中间体形成后,NHS离去基通过重排脱离,生成稳定的酰胺键。NHS离去基为N-羟基琥珀酰亚胺,其离去能力较强,使得反应在温和条件下即可高效完成。该步骤形成了共价键,将AT 590荧光团稳定连接到伯胺所在的生物大分子上。生成稳定酰胺键
反应最终产物是AT 590荧光团与蛋白质、抗体或多肽上的氨基形成的稳定酰胺键。该共价键化学稳定性高,不易水解,能够在生物实验条件下保持荧光信号和标记稳定性。- 现象状况的导致
- pH值:强碱至弱强碱有益于伯胺亲核性,并且坚持NHS酯不溶解。过低pH易减低想法传输速率,过高pH可以高速度溶解。
- 石油醚:水或缓冲器药液系为核心,可添加少量出导电性充分石油醚如DMSO以溶解性疏海底物。
- 工作温度:作用应该在空调温度或低温环境下实行(4–25摄氏),柔和状况限制荧光猝灭和生物技术团伙框架伤害。
- 摩尔比:NHS酯一般略过多以抓好标记符号充沛;对敏感性淀粉酶质,可调制摩尔比以减掉多一点偶联对节构或功能表的影向。
英文名称: ATTO 590 NHS ESTER*



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