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荧光素-巯基,FITC-SH的实验用途
发布时间:2025-10-11     作者:axc   分享到:
荧光素-巯基,FITC-SH的实验所应用领域

荧光素-巯基(Fluorescein Thiol,简称 FITC-SH)是一类功能化荧光探针,由异硫氰酸荧光素(FITC)经过化学改造引入巯基(–SH)而形成。FITC-SH 保留了荧光素的共轭芳香环结构,能够产生可测量的荧光信号,同时巯基提供了反应活性,可与含亲电子基团的化合物形成共价键。其分子结构通常包含荧光素核心、羟基、羧基以及巯基,使其在化学反应和光学性能上均具有应用潜力。

在电子光学性上,FITC-SH 的增进光波激发光谱约为 490–495 nm,射出光波激发光谱约为 515–520 nm,摩尔消光公式高,荧光量子成品率合适 ,会在水氢氧化钠溶液及减慢体制中控制可靠卫星信号。加入的巯基有生动的亲核性,可在轻柔情况下与马来酰亚胺、卤代烃、特异性酯或二塑炼物等反响,保证共价衔接。此作用使 FITC-SH 在化学上呈现和团伙标示中有相应灵特异性。

二、化学性质与反应优势
FITC-SH 的核心优势在于其双重功能:一方面为水溶性荧光团,适合生物体系或水相实验条件下使用;另一方面巯基能够与多种亲电子官能团反应,实现共价偶联。相比传统的 FITC,通过巯基形成的共价连接可选择性地标记含半胱氨酸残基的蛋白质、肽或其他分子,减少非特异性结合。此外,FITC-SH 在弱酸性至中性缓冲体系中相对稳定,适合在室温或低温条件下储存和操作。

生物反映中,巯基的亲核性能用于 Michael 暴伤、硫醇-亲电基融洽合或生成硫醚键等,反映能力柔和,可逃避目标值原子核设备构造的弄坏。使用调准 pH、萃取剂及反映日子,稳定制标签吸收率和偶联区域,为科学实验定制带来了调节器节性。三、实验操作作用
  1. 蛋白质和肽标记
    FITC-SH 可通过巯基与蛋白质或肽中的半胱氨酸残基形成共价键,实现荧光标记。标记后分子可用于 SDS-PAGE、Western blot 或荧光显微镜等实验。相比直接使用 FITC,FITC-SH 可实现更高选择性的位点标记,从而降低标记对蛋白质结构或活性的潜在影响。

  2. 分子追踪与示踪
    FITC-SH 可用于追踪标记分子在细胞或亚细胞水平的分布及迁移。由于其激发/发射波段位于可见光区,适用于共聚焦显微镜、荧光宽场显微镜或高通量成像设备。通过荧光信号,可以分析分子在胞内不同区域的分布和动态变化。

  3. 化学偶联与交联实验
    FITC-SH 的巯基可与马来酰亚胺、二硫化物或活性酯反应,用于构建荧光标记的化学复合物或材料。例如,可修饰聚合物、纳米颗粒或脂质体,形成可追踪的荧光纳米系统。该特性也可用于制备响应体系,如氧化还原条件下可控的荧光开关分子。

  4. 传感器构建
    巯基的化学活性可用于设计荧光传感器,如金属离子检测、氧化还原环境监测或酶活性分析。荧光信号随环境变化而改变,为化学或生物检测提供量化手段。

  5. 药物载体及纳米系统研究
    FITC-SH 可修饰纳米载体、脂质体或微球,用于研究其在体外或体内的分布和递送效率。通过荧光强度的变化,可评估载体的定位和释放行为,为载体优化提供信息支持。

  6. 高通量筛选与分子相互作用分析
    在分子筛选或蛋白质-配体相互作用研究中,FITC-SH 可标记小分子或蛋白质,通过荧光信号快速评估结合能力及动力学参数,为实验设计提供可重复性和量化手段。

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FITC-SH

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