CY7-LPS，CY7脂多糖的合并攻略

CY7-LPS 是将近红外染料 Cyanine7 (CY7) 化学或生物正交偶联到脂多糖（LPS，lipopolysaccharide）分子上的荧光探针，目的是在细胞摄取、膜结合和体内分布研究中实现低背景、深穿透的成像。由于 LPS 为复杂的糖脂杂合体（脂 A、核心寡糖与 O-抗原），且含有游离羟基、二醇和若干羧基/磷酸基团，常用的标记策略需考虑保留其构象与促炎活性，同时避免引入会导致聚集或去活化的强有机条件。

分解成方法大部分有四类：1是碳基羧酸碱化法（EDC/NHS）——利用率 LPS 本质或 O-抗原上的羧基（如 Kdo 的网络终端羧基）与氨基化的连接头（如 adipic acid dihydrazide, ADH）转变成紧密连接位点，继而用 CY7-NHS 与联接的胺不良响应生成二维码固定酰胺键。实行操作在强酸到普通水相（pH 5.5–7.4，MES 或 PBS）实行，EDC 消耗量往往为羧基当量的2–5倍，NHS 或 Sulfo-NHS 增强后面体固确定，溫度 0–4 ℃ 至制冷不良响应 2–12 h，一班闭光并温柔均匀搅拌以下降 LPS 聚积。第二是糖链空气被氧化物后肟/肼药剂学——用亚盐酸钠缓冲区的低含量值 NaIO4 湿润空气被氧化物糖环的二醇位合成醛基（保持时间段与温差以禁止过空气被氧化物脂 A），接着随后与 aminooxy-CY7（或 hydrazide-CY7）在 pH 4.5–6.0 下做肟缩合或肼缩合，表现一般而言在恒温 1–4 h 顺利完成，合成增强的肟/肼键。此法位点使用性好、情况湿润。三是"超链接"药剂学路由——先在 LPS 上接入短 PEG 链上的叠氮或炔基（经 ADH 或 EDC/NHS 连到），就用 CY7-DBCO 或 CY7-alkyne 在水相去 SPAAC 或 CuAAC（若用铜促使需严厉去掉铜阴阳离子并禁止挫伤 LPS）；SPAAC 不同金属材质、情况湿润且是和生物技术样件。纯化通畅选择四种结合：先用透析（MWCO 3.5–10 kDa）或超滤膜（30 kDa cutoff 视 LPS 聚合反应态而定）清掉存在颜料与分低子副乙酰乙酸；那么用妇科凝胶构建（Sephadex G-50/G-100）或制法型 SEC 区分不相同符号度的类物质；必需时用反相或亲水相色谱进十步精炼。单趟做到低分割、底温并放入多量非亚铁离子表面能催化活性剂（如 0.01–0.05% Tween-20 或 0.05% CHAPS）与低溶度 NaCl 以形成单乳状液性。表现措施举例：分光光度计-看得见/荧光光谱分析（日志 CY7 在 ~750 nm 的溶解与 ~770–790 nm 的卫星发射，由此算出符号度 DOL）；FTIR 可辅助制作分析新键建成；MALDI-TOF/ESI-MS 对局部 LPS 机制常异常，但可以使适用体系化寡糖或脂 A 片断的技术鉴定；SDS-PAGE/Tricine-PAGE 联动近红外影像与银染可显示信息符号后的系数分布图；催化收费学步骤（酚-浓盐酸法测糖水平、磷水平测定方法）适用效正 DOL 并测算有机染料与 LPS 的摩尔比。作用性论文检测建立：相对比较符号前前后后 LAL 内黑色素几丁质酶或身体外 TLR4 中上游的信号（举例 NF-κB 激发）以分析评估呈现对生物体学几丁质酶的反应。保存文档与保持稳界定：分开装袋、闭光、-20 ℃ 或 -80 ℃ 制冷保存文档，防止出现重复冻融；在生物技术检测前用长期搭建于 4 ℃ 化冻并轻缓混匀。后，符号导热系数的精微控制是关健——过高 DOL 可变换亲水/疏水失衡会导致结晶或减轻可溶性，觉得启始摩尔比小（0.5–2 dye per LPS repeat）并稳步提升。CY7-LPS 在吞灭上皮细胞摄食关注、宫颈炎症位置激光散斑与 LPS-相互之间用途分析中兼有比较重要应用软件价值量，但在深度解读生物技术学统计数据时需同時因素符号对 LPS 固有职能的不确定干预。

产品名称：CY7-LPS，CY7脂多糖

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