Sulfo-CY3-MAL,磺化CY3-马来酰亚胺的使用方法
车辆标题:Sulfo-CY3-MAL,磺化CY3-马来酰亚胺的使用的的办法应用方案箭头前预备:阶段目标碳原子办理:淀粉酶质:狠抓受众淀粉酶含游离态巯基(如恢复备份型谷胱甘肽治理崩裂二硫键)。多肽/核酸:立即应用巯基呈现的多肽或核酸(需认证呈现使用率)。减慢液使用:介绍减慢器液:PBS(pH 7.4)、HEPES(pH 7.0)或Tris-HCl(pH 7.5),以免含还原故宫场景剂(如DTT、β-巯基甲醇)的减慢器液(会竞争力的反应)。移除剂:可移除EDTA(1-5 mM)螯合金属材质亚铁离子,可以减少氧化的副不起作用。标记符号症状:摩尔比:基本上Sulfo-CY3-MAL与对方原子的摩尔之比1:1-5:1(咖啡因中毒染色剂可上升符号转化率,但需未果纯化去掉未响应染色剂)。现象组织体制:将Sulfo-CY3-MAL溶化于DMSO或DMF(终盐浓度≤10% v/v),极慢融入含对象原子的缓冲器液中,用适当的力度轻轻混匀后常温孵育。作用撤销:加入到量过大巯基无机化合物(如β-巯基乙酸乙酯至10 mM)淬灭未作用的马来酰亚胺基团,制止售后副作用。纯化与检验:纯化工艺:透析:支持于大分子结构(如淀粉酶质)的纯化,彻底清除未体现有机染料和小分子结构沉淀物。抑菌凝胶过滤系统:安全使用Superdex 75或200柱拆分记号有机物与未不良反应染色剂。HPLC:反相HPLC(如C18柱)可有效分离处理标出多肽或小碳原子。效验方式方法:荧光的检测:利用荧光分光光度计或抑菌凝胶显像软件证实记号物质的荧光导弹发射。SDS-PAGE:看齐记核球蛋白质含量去电泳解析,留意荧光条带与核球蛋白条带需不需要不一。质谱:用MALDI-TOF或ESI-MS确定标记图片代谢物的团伙量变化。幸福提升:仅中用科研课题,并不能中用人體研究!wyh