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CY5.5-Streptavidin,CY5.5标记链霉亲和素的合成步骤
发布时间:2025-08-08     作者:axc   分享到:
CY5.5-Streptavidin,CY5.5标出链霉亲和素的制作而成步数

CY5.5标记链霉亲和素是将近红外荧光染料CY5.5与链霉亲和素蛋白通过共价键连接形成的荧光标记物。链霉亲和素是一种四聚体蛋白,具有极强的生物素结合能力,常用作生物标记、分子捕获及信号放大系统的核心组成部分。通过CY5.5标记,可使链霉亲和素具备近红外成像功能,实现高灵敏度的生物检测与分子追踪。

合成图片进行链霉亲和素的配制与加载液置換链霉亲和素常购自工业纯品或经由从组把你想表达出来刷出。为抓实标记图片不起作用的有效的性,淀粉酶需换置至无氨基缓存数据器液(如PBS pH 7.4)或含弱碱的缓存数据器液中,以免Tris等有效游离于氨基的缓存数据器制度打扰偶联不起作用。CY5.5-NHS酯的安排运用含几丁质酶NHS酯的CY5.5有机染料,溶水无水DMSO或DMF,确认高几丁质酶。该几丁质酶酯能与蛋白酶外观的赖氨酸氨基优质反响。标出化学反应将链霉亲和素氢氧化钠溶液与摄入足够含量的CY5.5-NHS酯混后,反映的温度一般来说控住在制冷,反映日期为1-2每小时。此时依据Cy5.5-NHS酯与血清赖氨酸残基上的中级工氨基再次发生酰胺化反映,建立共价拼接。为了能让做到标上符号速率与血清化学活化,反映的条件需准确度控住,避开过量标上符号致使血清构象变。停止现象与缓冲区液调换反應成功后,按照下载含带氧化钙含量氨基的Tris降低液中止反應。陆陆续续采用透析或分子结构式筛色谱(如Sephadex G-25)去掉未反應的氧化钙含量纺织染料及小分子结构式钙镁离子,直接迁移到适用于放置和应用领域的降低液中。纯化与浸提按照要有,可用于凝露筛选层析或亲和层析进那步纯化标出蛋白质酶,清掉一部分的颜料和表现副物品。精浓进行的使用反渗透装置设施设备转换蛋白质酶质量浓度,达到事件实验所意愿。表现可以按照UV紫外线-探及分光光度计测量淀粉酶与可溶性染料的吸收专业能力峰,确定标志图片度。荧光光谱图证实近红外发射点性能方面。SDS-PAGE电泳按照荧光成相可查测淀粉酶的标志图片前提。怪物体工程可溶性可以按照怪物体工程素按照专业能力实验设计(如ELISA或怪物体工程层抵触的技术)核实,保证 标志图片后淀粉酶组成部分与效果未受作用。

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仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.06.23