Biotin-cRGD,生物素-环肽的合成方法
软件品牌:Biotin-cRGD,动物素-环肽的炼制工艺自动合成方法步骤(1)固相聚合法(SPPS)步1:获得cRGD多肽树酯取舍:Rink Amide硅橡胶:生产东东助手酰胺(c(RGDfK)-NH₂)。Wang聚酯树脂:转换成C互联网羧酸(c(RGDfK)-COOH)。核苷酸偶联:由大到偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH等。环化:在赖氨酸侧链氨基与天冬氨酸羧基相互演变成内酰胺键(在使用HATU/DIPEA产甲烷)。切割工作树酯:TFA/TIS/H2O(95:2.5:2.5)激光切,获取c(RGDfK)-NH₂或c(RGDfK)-COOH。部骤2:微生物素突显手段1:直观体现cRGD的氨基微生物素羧酸(Biotin-COOH)与c(RGDfK)-NH₂用EDC/NHS纯化生理反应:消融Biotin-COOH(1 eq)和EDC(1.5 eq)在DMF中,环境温度打料30几分钟。填加NHS(1.5 eq),仍然反响3015分钟。添加c(RGDfK)-NH₂(1 eq),pH 7.5-8.0,制冷的反应隔夜。HPLC纯化,能够得到Biotin-c(RGDfK)。工艺2:依据连入臂呈现先制成Biotin-PEG₄-NHS(商业地产可购),再与c(RGDfK)-NH₂生理反应:溶解性Biotin-PEG₄-NHS(1 eq)和c(RGDfK)-NH₂(1.2 eq)在PBS(pH 7.4)中。温度化学反应2一小时,HPLC纯化。(2)高效液相镶嵌法实适用小的规模分解或更复杂遮盖:提前炼制生物工程素-PEG₄-COOH,再用EDC/NHS与c(RGDfK)-NH₂偶联。优势可言:可精准调控响应必要条件(如pH、热度),避免副物质。(3)纯化与研究方法纯化:反相HPLC(C18柱):脱离未体现的生态学素或cRGD。分子结构结构筛层析(如Sephadex G-15):除去小分子结构结构其它杂物。表现:质谱(MS):认可氧分子式量(如Biotin-c(RGDfK)的策略氧分子式量≈1200 Da)。HPLC永久保存时候:与未绘制cRGD比较,手机验证溶解度(>95%)。生物学素吸附性在线检测:经过ELISA或荧光极化实验所认证与链霉亲和素的综合作用。和谐显示信息:仅使用在科研管理,没能使用在女性身体进行实验!wyh