mPEG-DBCO 促进 Fab PD-L1-IH18 PEG化及纯度评估
参考文献:动用原子设定的三维显像剂对*性*PD-L1*体手机定位确定多似然法三维显像链接代码://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5小说家:艾里斯·M·哈格曼斯,彼得·J·维尔斯特拉卡斯·施图滕Janneke DM 莫尔肯波尔-库南,杜科·范·达伦马丁·特尔·比斯特约店翰·MS ·范德舒特奥尔加·伊琳娜马丁·戈特哈特卡尔·G·菲格多尔费伦茨·A·舍伦,桑德拉·赫斯坎普马丁·维尔多斯节选:FabPD-L1-IH18 的聚乙二醇化和纯化将 10 Eq. (94.0 nmol) 的 mPEG-DBCO (Click Chemistry Agents, A120) 的 PBS (3.33 mM) 饱和悬浊液之间添加图片到 Fab PD-L1-IH18 的 PBS 饱和悬浊液 (470 µg, 9.40 nmol, 3.0 mg/mL) 中,使 Fab PD-L1-IH18 与 20 kDa PEG 偶联。将该相溶物在 37 °C 下孵育 90 多分钟,运行 Amicon Ultra-4 离心分离分离滤水保护装置设备 (MWCO 10 kDa (Merck, UFC801024)) 与 0.02 M 醋酸钠盐降低液 (pH 4.5,降低液 A) 对其来完成降低液传递,继而运行 1 mL HiTrap SP FF (GE Lifesciences, 17505401) 阳正离子传递柱在 NGC Quest Plus Bio-Rad 系统化上 0.5 mL/min 的来完成操作速度慢对其来完成纯化。用降低液 A 平横 8 个柱容积后,进入降低液 A 中 0.5 M NaCl 的线型均值(30 个柱容积中 0-0.5 M NaCl)。聚乙二醇化 Fab PD-L1-IH18 普通在约 8 个柱容积(0.15 M NaCl)后冲洗掉。运行 Amicon Ultra-4 离心分离分离 10 kDa MWCO 滤水保护装置设备(Merck,UFC 801024)和没有细菌 PBS 为降低液提液包含纯化化合物的级分,并完成 12% SDS-PAGE 对其来完成讲解。运行 Nanodrop 检测法法质量浓度。完成运行 BCA 讲解(Pierce BCA 蛋清酶质检测法法化学药品盒,ThermoFisher Scientific)校验该措施的准确性。如上所说,完成对其来完成强度检测法法法来明确蛋清酶质溶解度。溶解度 Fab PD-L1-IH18-PEG 20kDa = 89%。