mPEG-DBCO 修饰抗体的位点特异性结合与纯化流程
文献资料:选择碳原子确定的成相剂对*性*PD-L1*体定位功能做好多标准成相微信链接://link.springer.com/article/10.1186/s12951-022-01272-5做者:艾里斯·M·哈格曼斯,彼得·J·维尔斯特拉卡斯·施图滕Janneke DM 莫尔肯波尔-库南,杜科·范·达伦马丁·特尔·比斯特约店翰·MS ·范德舒特奥尔加·伊琳娜马丁·戈特哈特卡尔·G·菲格多尔费伦茨·A·舍伦,桑德拉·赫斯坎普马丁·维尔多斯节选:位点活性朋友酶促联系优化系统后,实用0.5-1.0 mg*体(片断)和25 eq IH18或IH20对mIgG1 PD-L1实现文件一键分选,实用50 eq IH18或IH20对Fab PD-L1实现文件一键分选。用EDTA(终溶度为10 mM)解除不良发生发生化学反应迟钝后,将不良发生发生化学反应迟钝相溶物与200 µl Ni-NTA珠在高温下孵育2030分钟,以抛开未不良发生发生化学反应迟钝的*体和分选酶。实用空的自动旋转柱(Jena Bioscience,AC-552-25)将夜明珠从不良发生发生化学反应迟钝相溶物中分头离,然后用洗衣降低液(50 mM NaH 2 PO 4 .H 2 O,300 mM NaCl,20 mM 咪唑,0.05%Tween 20,pH 8.0)洗衣1次,用PBS洗衣1次。将不良发生发生化学反应迟钝相溶物和洗衣级分并入,并实用长宽比排阻色谱法(SEC)纯化,以 PBS 中的 1 mM EDTA 做降低液(10 mL/min)。将有代谢物的级分并入,并实用 Amicon Ultra-15 离心式做出过滤装置设备、MWCO 10 kDa(Merck,Z717185)浓缩造成。实用没有细菌 PBS 实现降低液对换。在 NanoDrop 上判断*体溶度,实用 UV-vis 方式,在 280 nm 处精确自动测量IH20,在 280 和 646 nm 处精确自动测量IH18。在还原成必备条件下实用 SDS-PAGE 凝胶的作用电泳(12% 丙烯酰胺)考核球核苷酸色度,相比食材、代谢物和用 5 kDa mPEG-DBCO 打开网页的代谢物,以认证拥有重链的作用化。各个倡导体生产的一些批号,并在实现身体之外和体内的测试前面将一些批号并入,以保持批号均性。实用硬度判断法定标准量球核苷酸色度。在ImageJ中实现硬度判断,理解为(代谢物条带-经验)/(非代谢物条带-经验)×100%。色度mIgG1 PD-L1-IH18 = 85%,Fab PD-L1-IH18 = 96%。