DOPE-PEG-Biotin在巨型单层囊泡膜构建中的应用研究
医学文献:脂质膜上的水分子安装方法图片链接://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5小说家:卡斯帕· 范德韦尔1∙多丽丝 ·海因里希1,2∙丹妮拉·J· 卡拉夫特1节选:无机化工品苯乙稀 (99%)、衣康酸 (99%)、4,4'-偶氮双 (4-氰基戊酸) (98%)、D-草莓糖 (99%)、牛血清廉淀粉酶 (98%)、甲醇 (99.9%)、氯仿 (99%)、磷酸钠 (99%)、腐蚀氘 (70%)、N-羟基磺化蜜腊酰亚胺钠盐 (98%) 和 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-4,4-二氟硼氮杂引达省苯 (97%, BODIPY) 购自 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO;甲氧基聚(乙二醇)胺 (mPEG, M W = 5000) 购自 Alfa Aesar;氯化钠 (99%) 和叠氮化钠 (99%) 购自 Acros Organics; 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺稀盐酸盐 (99%),来于 Carl Roth;NeutrAvidin (*动物技术素淀粉酶) 和霍乱黑色素 B 亚基 Alexa Fluor 488 通过物 (霍乱黑色素 488),来于 Thermo Scientific;DNA 寡核苷酸 (动物技术素-5′-TTTAATATTA-3′-Cy3),来于 Integrated DNA Technologies;或是来于Avanti Polar Lipids子公司的Δ9-顺式1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(动物技术素基(聚乙二醇)-2000) (DOPE-PEG-动物技术素)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰基) (DOPE-罗丹明)和G M1面神经节苷脂(GM1)。任何普通机械品均按原样应用。任何实验操作均应用用Millipore滤出程序(Milli-Q Gradient A10)得到 的阻值比率18.2 M Ω cm的去化合物水。膜制取采用了标准规范电胀大能力分离纯化直径约为 5 至 20 μm的巨乌贼单面囊泡 (GUV) ( 14 )。在氯仿中分离纯化 2 g/L 的脂质混和物,其由 97.5 wt.% DOPC、2.0 wt.% DOPE-PEG-生物制品素和 0.5 wt.% DOPE-罗丹明组成的。现在来,取 10 μL该液体在二块 6 cm2 的氧化反应铟锡纳米涂层载玻片上(15–25𝛺,Sigma-Aldrich),第二水的压强在富含100 mM 提子糖和0.3 mM 叠氮化钠的49:51 D2O:H2O液体中。方便引诱囊泡演变成,将电*放置于10 Hz 下1.1 V (rms) 电阻下快速2小时内。将从得到的囊泡儲存在温度牛血贞洁血清包被的小瓶中。方便缓和较小囊泡的用户,我们的在适用前马上适用Whatmann 5.0 μm内径氯化铵玻璃硅酸镁油烟净化器器油烟净化器GUV 液体( 15 )。相对于膜管化实验设计,适用面神经节苷脂GM1和颜料霍乱毒物488正式膜小叶对其开始固色,有以下几点图甲中:将作出氯仿中的脂质混和物更换到甲醇中,增添0.2 wt.% GM1。第二按作出方式 对其开始电胀大。打样定制分离纯化事先,将 50 mg/L 霍乱毒物 488 增添到磷酸缓存盐液体 (PBS) 中,仅对囊泡的最外层对其开始固色。