DSPE-PEG-Cy7标记胶束的合成与纯化流程
参考文献:尺寸大小、电荷量和肽配体长宽高对小有机质纳米级塑料颗粒肾脏靶向疗法性的危害链接搜索://aiche.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/btm2.10173小编:黄毅, 蒋凯瑞, 张旭亭, 殷志忠节选:胶束结合实现原则Fmoc介导的固相肽炼制法,在全重新PS3肽炼制仪(美式亚利桑那州图森市Protein Technologies司)上,动用rink Amide树酯(美式亚利桑那州图森市Protein Technologies司)炼制肽。那些肽编码序列的N末段均填加半胱氨酸,以确定硫醚键合响应。之后用密度比是94:2.5:2.5:1的三氟乙酸:1,2-乙二硫醇:水:三异丙基硅烷将肽从树酯上割下。割下的肽用寒冷的乙醚沉淀自己并洗洁无数次,不能溶解Milli-Q纯海里,冻干后储藏于-20°C。粗肽实现反相提高效率色谱仪色谱法(HPLC)(Shimadzu,京都,日本的)在 C18 柱(Phenomenex,Torrance,CA)上在 55°C 下要 0.1% 甲酸的乙腈/水比调物确定纯化。便用基本材料辅助性智能机械解吸电离飛行时段质谱研究 (MALDI-TOF) (Autoflex speed, Bruker, Billerica, MA) 对纯化的肽展开定量分析,并确认硫醚键与 1,2 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸无水乙醇胺 N-[马来酰亚胺 (聚乙二醇)-1000/2000/5000] 或 DSPE-PEG (1000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (2000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (5000)-马来酰亚胺 (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL) 运用,将等摩尔量的脂质和纯肽在 Milli-Q 水 (pH 7.2) 中混合式,室内温度下慢慢的拌和以上 24 个小时。相溶物经C4柱(Phenomenex新大公司的,加州托伦斯)进几步纯化,同用如上所写的MALDI-TOF做分析方法。荧光团偶联模型的炼制有以下:将等摩尔量的Cyanine7 NHS酯(Lumiprobe新大公司的,马里西安亨特谷)与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸无水乙醇胺N-[氨基(聚乙二醇)-1000/2000/5000](铵盐)或DSPE-PEG(1000)-胺/DSPE-PEG(2000)-胺/DSPE-PEG(5000)-胺(Avanti Polar Lipids新大公司的,阿拉巴马州阿拉巴斯特)在0.1 M碳酸氢钠溶剂(pH 8.3)中相溶,常温一晚。相溶物经C4柱纯化,同用如上所写的MALDI-TOF做分析方法。用自折装镶嵌了13总类型的胶束。镶嵌了由各种不同摩尔比的两亲原子组合成的胶束:100% DSPE-PEG-肽、50:50摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽、90:10摩尔比的DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7和45:45:10摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7。将各个的可溶性高,溶于水的于甲醇或氯仿中,互用氦气吹一吹导致胶片。胶片在机械泵下吹干過夜,并在80°C用水化30半小时。在 DLS、zeta 电势差在线测量和 TEM 的胶束在 Milli-Q 水污水化,而在内给药的胶束在磷酸二氢钠保护稀硫酸 (PBS) 污水化。



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