蛋白质的荧光标记技术
蛋白质的荧光标记技术
蛋白荧光标记是将荧光分子共价连接到蛋白质上,用于成像追踪、结构分析、相互作用研究、流式分析、ELISA与生物传感等。常见目标蛋白包括抗体、酶、膜蛋白、激素与重组蛋白等。
标记策略:
赖氨酸侧链标记(常见):
- 使用的NHS-FITC、NHS-Alexa Fluor等;
- 标记图片简单便捷,但不具位点目的性;
半胱氨酸特异标记:
- 利用Maleimide荧光电极(如Alexa Fluor 488-Maleimide);
- 能提供位点进行性遮盖;
定点标签标记(如His-tag、Avi-tag):
- 可以用带亲和价签的荧光测试探针/链霉亲和素耦联染剂;
标记度控制与检测:
- 干预响应摩尔比;
- 通过分光光度法(280/λmax)旋光度的测定呈现率;
- SDS-PAGE、质谱手机验证完整版性;
推荐荧光试剂与产品:
FITC、TRITC、Rhodamine B(经典绿色/红色标记)
Alexa Fluor系列(488、555、647):高亮度与稳定性
Cy3、Cy5、Cy7 NHS/Maleimide:适合蛋白成像与流式
Dylight系列染料:广谱应用
荧光标记链霉亲和素/蛋白A/G:用于间接标记系统
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