Sulfo CY3-DBCO，CAS:1782950-79-1制备成空心微针递送合成mRNA的文献分享

Sulfo CY3-DBCO（磺硝化作用CY3-DBCO）Sulfo CY3-DBCO 也是种水阴化合物型荧光有机染料，采用铜化合物轻松自由的点开量物理化学作用。它运用了Sulfo-CY3（磺过酸Cyanine 3，鼓励可见光光谱550 nm，发射点可见光光谱570 nm）与DBCO（双环辛炔）功能模块团，由是可与叠氮类有机化合物参与如何快速、特男人的 SPAAC 作用（应力应变提高网站的叠氮-炔点开量作用）。因此其磺酸基团激发了水阴化合物型，Sulfo CY3-DBCO 很适采用在水溶性模式招标签蛋清、抗体阳性、核酸和多糖叠氮修饰物。它在肿瘤细胞标签、活体影像、生物学制品共轭等研究分析中都具有广泛操作操作，尤为比较合适于暂时无法促使剂的生物学制品模式中。

一、基本信息

名称：Sulfo-CY3-DBCO

中文名称：磺酸化CY3-DBCO荧光探针

CAS:1782950-79-1

分子量：889

性状：红色粉末

结构：

 

应用：

1、血生殖细胞图标和激光散斑：将Sulfo-CY3 DBCO与包含叠氮官能团的动物团伙共价偶联，第二步用到血生殖细胞激光散斑实验操作，多维分析特殊动物团伙的位置上和地域分布。2、球高氨基酸酶-球高氨基酸酶相护影响钻研：Sulfo-CY3 DBCO能作于标记图片球高氨基酸酶，以钻研球高氨基酸酶-球高氨基酸酶相护影响和信息信号通路。3、微生态学学感测器：制法原子核探头和微生态学学感测器器，使用在检测工具微生态学学模板中既定微生态学学原子核的来源于和密度变换。

文献：

文章来源：

//www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

文章来源：

//www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

作者：

Sonia Golombek ∙ Martin Pilz ∙ Heidrun Steinle ∙ Efrat Kochba ∙ Yotam Levin ∙ Dominique Lunter ∙ Christian Schlensak ∙ Hans Peter Wende ∙ Meltem Avci-Adali

摘要：

近来来，由于获得图片mRNA在体血受损肿瘤生殖细胞中生育必需外源血清的操作更加越首要。但是，获得图片mRNA的整体递送或许造成的非特情人摄取量到不用的体血受损肿瘤生殖细胞或器宫中，因而始终无法靶向疗法药物必需的体血受损肿瘤生殖细胞。但是，获得图片mRNA的边缘和靶向疗法药物递送而言触达必需的体血受损肿瘤生殖细胞款式和集体变的更加越首要。在这个研究探讨中，监测了动用由于弧形微针注谢的手段确定获得图片mRNA皮内递送。凡此种种，创建了离体猪皮模特，以解析皮内给药后肤质吧中获得图片的mRNA介导的血清质表明方式。动用该模特，事实证明了获得图片mRNA的更高质量递送，这造成的检侧到由进样器注谢的获得图片mRNA编号规则的高技术可外分泌的人源化Gaussia萤光素酶（hGLuc）血清。有趣的英语的是，在并没有转染生化试剂的前提压注谢的获得图片信使核糖核酸还要進入体血受损肿瘤生殖细胞并造成的血清质表明方式。在现在开始体里实验操作之间，创建的离体猪皮模特能用的 于监测皮内递送获得图片mRNAs后必需血清质的成功的 生育。凡此种种，微针的动用使获得图片mRNAs要友爱、无痛、更高质量地气流输送达真皮层中；但是，该手段能用的 于差异肤质吧病的边缘疗法及及役苗疫苗注射和免疫系统疗法。 

方法：

合成hGLuc mRNA的Cy3标记

实现无Cu（I）（DBCO）点化学上的对分解mRNA参与Cy3图标。前提，在IVT时将5-叠氮基-C3-UTP掺加分解mRNA中，接着随后不久实现与DBCO-Sulfo-Cy3孵育将Cy3与5-叠氮基-C3-UTPs依据。但是，在IVT时，的运用1.9 mM 5-叠氮基-C3-UTP（美国耶拿市耶拿生物技术学科平台）和5.6 mM伪UTP用于7.5 mM假UTP。会根据创造商的表示，的运用RNeasy MinElute治理化学化学药品盒（QIAGEN）纯化IVT体现混后物。接着随后不久，在37°C下，将5-叠氮-C3-UTP表达的mRNA与需求量为5倍摩尔大量的DBCO-Sulfo-Cy3（Jena Bioscience）一同孵育1钟头，用无核酸酶的水调结。的运用统计资料表统计DBCO-Sulfoo-Cy3的摩尔量与叠氮图标的mRNA的量的社会关系。的运用RNeasy MinElute治理化学化学药品盒（QIAGEN）重复纯化体现混后物，实现1%琼脂糖凝露电泳跟去制冷（RT）下在使用1×GelRed在三硼酸EDTA（TBE）中染色剂30分种来确认mRNA的溶解度。的运用光度计校正渗透压，并将mRNA贮藏在-80°C下。 

结论：

Synthesis of hGLuc-Encoding mRNA and Labeling with Cy3

hGLuc编码mRNA的合成及Cy3标记

还有就是，为了更好地可在皮内递送后查重工具镶嵌的 mRNA，安全用无 Cu(I) 的叠氮化物-二苄基环辛炔 (DBCO) 打开物理将 hGLuc mRNA 标示为 Cy3，当中 Cy3 原子核在IVT后与镶嵌 mRNA 中加入适量的 5-叠氮基-C 3 -尿苷三磷酸 (UTP) 搭配。在图 1 B 中，安全用紫外光散射仪就能够清淅地看看 Cy3 标示的 mRNA 带。在约 900 个碱基总长度处查重工具到*强的荧光走势。或许，还就能够看看另一个两人在 1.5 和 2 kb 处的弱带。出来各个 Cy3 标示带的问题机会是搭配的 Cy3 原子核的使用量。各个 mRNA 的 Cy3 原子核使用量越小，原子核量就越大。未加Cy3标示的mRNA经GelRed刺绣后可清淅查重工具到，且与抗压强度*高的Cy3标示的hGLuc mRNA居于一个高强度。

 

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