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Magarose-NHS,NHS活化琼脂糖磁珠用于含氨基的蛋白或多肽的耦联,使用方法介绍
发布时间:2023-02-20     作者:zhn   分享到:
NHS 产甲烷的琼脂糖磁珠(Magarose-NHS)将血清质简单易行**地共价规定到磁珠质粒载体上,为抗原、抗原或其它菌物氧大原子的亲和纯化给予了有颜值的技术。产甲烷的琼脂糖磁珠内含并能与血清质或其它氧大原子上的伯胺化学体现导致调整的酰胺键的 N-羟基琥铂酰亚胺(NHS)官能团。藕合化学体现在 pH 7~9 的无胺储存液中实现。不知道配体的氧大原子量或等电点(PI)藕合化学体现的成功率均达到 80%。迟早会配体被规定,所光催化原理的琼脂糖磁珠既能以被使用到强有力的加密管控亲和纯化系统中。 

Magarose-NHS

英文怎么说公司名称:Magarose-NHS


中文字明称:NHS活性琼脂糖磁珠


      NHS琼脂糖微球


磁珠溶液浓度:25% (v/v)  in *** 异丙醇


配基高密度:~ 50 μmol NHS/ ml磁珠


媒质:6%交连带磁琼脂糖


粒度分布:20-45μm


配体融合:>20 mg IgG/ml磁珠


保留:2~8℃


偶联用琼脂糖磁珠


羧基滋养琼脂糖磁珠|羧基琼脂糖微球|Magarose-COOH


氨基碱化琼脂糖磁珠|氨基琼脂糖微球|Magarose-NH2


NHS纯化琼脂糖磁珠|NHS琼脂糖微球|Magarose-NHS


环氧漆树脂基碱化琼脂糖磁珠|环氧漆树脂基琼脂糖微球|Magarose-Epoxy


CNBr纯化琼脂糖磁珠|CNBr琼脂糖微球|Magarose-CNBr


醛基产甲烷琼脂糖磁珠|醛基琼脂糖微球|Magarose-CHO


琼脂糖带磁微球|琼脂糖磁珠|Magnetic agarose bead


蛋清纯化琼脂糖磁珠


Protein A/G包被琼脂糖磁珠|Protein A/G包被琼脂糖微球|Magarose-ProA/G


Strep-tag II淀粉酶纯化磁珠|Strep-Tactin琼脂糖永磁铁微球


DEAE弱阴亚铁离子相互交换琼脂糖磁珠


肝素包被琼脂糖磁珠|Heparin包被琼脂糖微球


GST交融蛋白质纯化用琼脂糖磁珠


His-tag标记蛋白酶纯化磁珠Magarose TED


组氨酸商品标签蛋白质纯化磁珠|Magarose NTA


His那些固化的标签蛋清纯化磁珠|Magarose IDA


羧基磁珠|羧基带磁微球|羧基带磁納米阿尔法粒子


Fe3O4磁核|超顺磁块奈米空气氧化铁|铁氧体磁珠|200-400nm磁块奈米离子



NHS- Activated Magarose Beads 是一种种预产甲烷的琼脂糖吸引力微球,能能同时适用含氨基的血清或多肽的耦联。预产甲烷媒质能能按照需准备成***亲和媒质,便捷**地从复 杂模式中两步纯化合理的产品。食用形式


1. 加载液


整个的水和缓冲液均用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜展开过滤系统。


1)Washing Buffer A: 1 mM 稀盐酸,应用前水冷却到 4?C;


2)Coupling Buffer A: 100 mM 2-吗啉乙磺酸 MES,pH 4.8(代替等电点低于 7 的海洋生物碳原子的偶联);


3)Coupling Buffer B: 200 mM NaHCO3, pH 8.3(应用在等电点不低于 7 的生物技术碳原子的偶联);


4)Blocking Buffer: 3 M 甲醇胺,pH 9.0;


5)Storage Buffer: 含效率成绩为 0.05%叠氮化钠的 PBS 降低液还表明潜在客户自个消费需求用到任何降低液。


2. 方法关键性点


1)各举磁珠清洗要严格规范以反映书利用蒸发的 Washing Buffer A高速 清洗 ,避免磁珠在清洗环节中 NHS 基团蛋白质水解;


2)血清偶联流程中,先是要根据检测选定合适的的 Coupling Buffer(主耍属于 Coupling Buffer A 、Coupling Buffer B)、50 mM 硼酸盐溶液pH 8.5、100mM磷酸缓存液,100mM NaCl,pH7.4这四类);


3)决定为宜的Coupling Buffer后,再通过Coupling Buffer 为条件,决定为宜的偶联球蛋白质酶酶酶酶氨水氧盐浓度,根据球蛋白质酶酶酶酶氨水氧盐浓度越高,偶联到磁珠上的球蛋白质酶酶酶酶的量会越大(这些是随着 NHS 基团跟球蛋白质酶酶酶酶偶联和 NHS 基团客观事物淀粉水解是一个对寡头垄断发应)。本来前方要总合注意动用性和投入,有哪些大家偶联一定量的球蛋白质酶酶酶酶便可足够动用具体需求,这时候按照低氨水氧盐浓度的球蛋白质酶酶酶酶便可,那样能能降***。


4)封闭式管理型式管理型这一步一个脚印骤都就可以选择3 M 甲醇胺,也更易用 Tris 缓冲区液(100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0),封闭式管理型式管理型时期应当底于 2 h,假若物理化学封闭式管理型式管理型腰部景依旧很高,还都就可以减半加一步一个脚印骤 BSA 封闭式管理型式管理型。


3. 蛋白酶偶联的操作步奏


这操作使用的过程以取磁珠产品的样品 400 μL,进行 1.5 mL EP 管为例子了解。大家可依据自我需要量按比率调节。


血清水饱和溶剂配比:取一定量待偶联血清用 Coupling Buffer 熔化分解,配比质量氧化还原电位为≥3.0 mg/mL 的血清水饱和溶剂。早已经手机截图于 buffer中的血清,想要经过透析或许脱盐的策略***弄掉原始 buffer 里含伯胺基的产物,进而再换 Coupling Buffer 配比质量氧化还原电位为≥3.0 mg/mL 的血清水饱和溶剂,将配比好的血清水饱和溶剂于4℃手机截图预备。


注: (1)为到效果更好的性能方面,核蛋白酶浓硫酸浓度≥3.0 mg/mL,这类偶联速度会极高,彼处需综合性遵循成本费用和的使用必须; (2)核蛋白酶饱和溶液中没法有带伯氨基的基本成分,比如说 Tris,甘氨酸,明胶,BSA 等;


1)取 400 μL 25%磁珠浮动液于 1.5 mL EP 管上。磁剥离,去掉上清液。


注:磁珠取样方法前可以总是倒转、采用涡旋式自由振荡器使其结合透亮,以保证质量检测的一模一样性,每取有一次样可以直接混匀。


2)加 1 mL 2~8℃的 Washing Buffer A于离心式分液漏斗,涡旋式 15 s,使磁珠混后不光滑。将 EP 管置入磁铁分开架内,生物富集磁珠,清理上清液。


3)加 200 μL 蛋白酶悬浊液于 EP 管内,涡旋式 30 s,使其搭配饱满。


注:磁珠清洗后要直接参与血清饱和溶液。


4)将 EP 管涡流式 15 s,放于垂线于搭配仪上,温度搭配 2~4 h。若是 垂线于搭配不饱满,则反应迟钝前 30 min,相隔5 min 取出 EP 管涡流式 15 s。而后,相隔 15 min,取出 EP 管涡流式 15 s。


注:比如要有能在 4?C 不良反应住宿。


5)通过吸引力提取架含有磁珠,同步保存上清。加 1 mL Blocking Buffer于 EP 管内,涡旋式 30 s,将 EP 管放至吸引力提取架内,含有磁珠,弃上清液。


注:Blocking Buffer不但化学化学试剂盒中出示的 3 M 乙酸乙酯胺外,也也是可以的使用 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0 等以外的别的封端化学化学试剂。


6)加 1 mL Blocking Buffer于 EP 分液漏斗,涡旋压缩机 30 s,将 EP 管置纵向混合型仪中温度不起作用2 h。将 EP 管移至带磁拆分架内,含有磁珠,弃上清液。


7)加 1 mL 超注射用水于 EP 管内,充足搭配,用ed2k架丰度磁珠,弃上清液。


8)加 1 mL Storage Buffer(诸如含 0.05%叠氮化钠的 PBS 响应液,也许合作方跟据自己的事实使用需求选最合适的保持氢氧化钠溶液 )于 EP 管上,彻底的相溶,用种子链接架聚集磁珠,弃上清液。重复使用该操控 2 次。


9)融入 400 μL Storage Buffer于 EP 分液漏斗,全面搅拌,4?C 留存自备。




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