fitc荧光染料激发发射波长是多少?Fitc的使用方法介绍!
fitc荧光染料激发发射波长是多少?Fitc的使用方法介绍!
FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)是种特色且丰富操作的红色荧光活性染料,在免疫检测学、人体细胞系怪物学和怪物理生物学学学测试中被用到标上抗体阳性、血清质、多肽、寡核苷酸等,使用于荧光显微镜、普鲁士蓝染色人体细胞系术(FACS)、ELISA和各式怪物影像。基本信息
中文翻译名号:异硫氰酸荧光素英语英语缩写:FITC增加激发光谱(Ex):约 495 nm试射光波波长(Em):约 519–525 nm荧光有颜色:黄绿色原子核量:约 389.4 Da(FITC-NH2);依赖感于装饰结构融化性:可易溶DMSO、DMF、少许生产溶液;低水溶解性化学结构与偶联机制
性能基团:异硫氰酸基(–N=C=S)影响制度化:可与生物制品碳原子的伯胺(–NH₂)的发生共价症状,长用于抗原、血清质或多肽的标示。
应用领域
表面抗原/蛋白酶标识FITC经常用到于抗体荧光实验英文(IF)或免疫印迹人体细胞术(FACS)进标记一抗或二抗,非常方便追查计划分子结构的展示与匀称。流式的人体细胞术标上上皮细胞系面上或胞内抗原,广泛用于上皮细胞系基因分型、凋亡进行分析、吸附性监测等。荧光显微显像可论文检测肿瘤细胞或阻止中抗原的产品定位和理解,依据FITC标识抗体阳性满足绿化卫星信号体现 。多个复染与别荧光纺织染料(如TRITC、DAPI、Cy5等)结构应用于多工作区三维成像实验英文。DNA/RNA检测器标出可与寡核苷酸无线连接,用到FISH、混种杂交探头和qPCR探头激发。✅ 优点
操作多方面,都具有高速熟的操作安全体系成本预算低,非常容易修改与部分探测软件系统兼容(如高倍显微镜、免疫印迹、酶标仪等)缺点和注意事项
光稳定性力差:易被太阳光照溶解,长耗时曝料会形成荧光淬灭,需遮光操作的pH铭感:荧光标准受pH影响到极大(在 pH 6.5~8.0 范围之内内较相对稳定)易蛋白质水解:异硫氰酸基团对水刺激性,应现配所用荧光平均使用寿命短:卫星信号定期性差异,不满合长时程搜寻影像常见FITC衍生物
产生物结构类型 | 应用场景与原因分析 |
FITC-NHS | 与伯胺(–NH₂)症状,使用于抗体阳性、核蛋白标识 |
FITC-dextran | 标示多糖,适用内吞科学实验、膜南北通透性探测 |
FITC-PEG | 标出聚乙二醇氧分子,提生水阴离子型、可靠性 |
FITC-avidin/streptavidin | 与菌物素设计协调食用,建设查重网上平台 |
与其他绿色荧光染料比较
纺织染料 | 激活/发射点主波长 (nm) | 光安全性 | 结构特征 |
FITC | 495 / 519 | ★★ | 价格低,易得,光比较稳确定稍差 |
Alexa Fluor 488 | 495 / 519 | ★★★★★ | 更强移动信号,越来越高光维持性 |
GFP(草绿色荧光蛋清) | ~488 / ~509 | ★★★★ | 遗传基因商品编号形容型标签纸,可以活受损细胞 |
抗体FITC标记操作简要流程(NHS酯法)
容解FITC-NHS于DMSO(预防水)将蛋白酶质混溶偏碱性缓存液(如0.1 M NaHCO₃,pH 8.5)按比例表加进FITC-NHS液体(平常摩尔比值5~20:1)闭光孵育1分钟用透析或凝胶的作用滤水柱快速清理游离子FITC测量标上效果(完成光规格比OD495/OD280)总结
FITC 就是种经典的、效率且必备条件的荧光染色剂,适宜于各种菌物标志科学实验设计。它的健康荧光警报流畅、利于论文检测,但在太阳光照和pH必备条件下需管控,时候长短期观看科学实验设计和日常标志。