琥铂酰亚胺酯双吖丙啶（succinimidyl ester diazirine,SDA）电学试剂不是类新的电学化学交联剂，其可将已被灵魂存在的氨基反應电学与创新性且**的源于双吖丙啶的光电学整合，应用于将包含的氨基的大分子电学化学交联到近乎一切同一作用基团上。SDA热塑剂涉及十二种有机化合物，这句话还具有各种的距离臂段长度，各种的剪截热塑蛋清的作用或是各种的膜彻底通透性（有或无带电体基团）。蛋清热塑是用做研究分析蛋清设计或是维持蛋清-蛋白质主动效果的根本系统。

在阻止蛋白质酶双方功用时，双功效性氨基或巯基现象化学交联剂必须要不同蛋白质酶上的某一安基酸基团（举例，赖氨酸或半胱氨酸）极具非常合适的差距。SDA交连剂能够 用到氨基反应迟钝渗透性的N-羟基虎珀酰亚胺酯（NHS ester）对其中一种蛋白质质来进行相应记号，之后运用分光光度计线产甲烷将双吖丙啶化学交连于**种蛋白质质的同一个安基酸侧链或肽段骨马路上，最后避只开某一要求。体系结构双吖丙啶的光化学交连剂较体系结构苯基叠氮化物的光化学交连剂兼有更有效的光相对稳判定，然后方便被长波分光光度计光（330-370nm）活性。

N-羟基琥铂酰亚胺酯双吖丙啶(NHS–ester diazirine) 衍化物（SDA，LC-SDA 和SDAD ）不兼容感应起电基团，因而享有膜很通透性。此特征使其适宜用在癌细胞内和膜内交连。反，Sulfo–SDA，Sulfo–LC–SDA 和Sulfo–SDAD 含带负带电粒子的氢氧化钠基础团，改善效果了其水溶解性并影响了其膜透明性，对此可将其用作血细胞外蛋白酶的化学交联。SDAD 和Sulfo–SDAD 的间断臂中还含有颗个二硫键，可被回归剂切剪。

选择NHS–Diazirine实现内部内和内部外蛋白质的光生理反应性交联是为了验证在使用SDA化学药品将内部内蛋清黏结体确定光表现性交联，我探测了HeLa癌细胞含有关尽早内吞体抗原1(early endosome antigen, EEA1）血清酶的血清酶互不反应。EEA1采用卷缩双螺旋形式域(coiled coil domain) 达成同源二聚体，结合在一起到磷脂囊泡上, 进行内吞体的搬运。细胞系用各种各样的NHS-Diazirine衍化物孵育还用紫外线光工作。而后将肿瘤细胞裂解齐头并进行SDS–PAGE阐述，动用抗EEA1抗体阳性确定Western blotting 讲解。显示于红外光谱线后，EEA1挪动率变低的的方式仅在SDA和SDAD外理的合格品中论文检侧到，而在模拟训练外理差表合格品中未论文检侧到（如图所示）。

NHS-ester diazirine 交连长效机制。在pH 参考值7-9 的缓解液中，NHS ester 与伯胺基团（-NH2）**发生反应变成安全稳定的酰胺键并移除NHS。在使用长波分光光度计光（330-370）光活性酶类双吖丙啶建立有活性酶类的碳烯前面体。只要的前面体利用进第一步作用与对照间距臂大小多远上的其中任何氨基侧链或肽段骨架建立共价键。

是因为EEA1是細胞内蛋白酶复合型体，它就不会被不透細胞膜的Sulfo–SDA化学交联。除此以外，都具有更低移动率的、SDAD–化学交联的EEA1可被重置剂二硫苏糖醇（dithiothreitol, DTT）在相隔臂内截取。从而阐明人体细胞结构蛋白酶热塑，咱们比较了食用可逆反应的磺化的N–羟基琥铂酰亚胺–双吖丙啶（Sulfo–SDAD），磺化的苯基叠氮化物化学交联剂（sulfonated phenyl azide, Sulfo–SANPAH）或同源双作用N–羟基硫代虎珀酰亚胺酯（BS3）治理 细胞核后异二聚体钠/钾（Na/K）ATPase 的热塑原因。检样操作BCA球蛋白酶一定量法标淮化球蛋白酶含锌量，但是用抗GAPDH的抗体阳性的检测以取决于等量上样。裸漏于直射线后，经过Western Blotting留意，运行Sulfo–SDAD解决的试品比施用Sulfo–SANPAH或BS3加工处理的打样定制分明包括很多的上皮细胞表面层Na/Kβ链交连结果。

NHS-Ester Diazirine（SDA）热塑剂在组织内热塑EEA1 球蛋白组合体。HeLa 细胞膜（2×106） 在PBS 常用1mM 的SDA，Sulfo-SDA，LC-SDA 或SDAD 标示10 分鐘。未症状的NHS ester 用终浓硫酸浓度100mM，pH8.0 的Tris•HCl 淬灭5 钟头，第三用PBS 洗條。NHS-diazirine 图标的细胞膜和仿真解决比对在PBS 中运行Stratalinker2400 在365nm 处紫外光线照光15 一分钟，空距为4cm。紫外光线工作后，裂解细胞膜导入蛋白酶，便用BCA 球蛋白质化学发光法微生物培养基盒了解总球蛋白质酸度。不仅有一款重复使用的SDAD进行处理土样（-DTT）以外，每个样板取10μg 融入还原成性试样保护液，用SDS-PAGE 做出分离法。结杲运用抗EEA1 抗体阳性实现Western blot 开始分享。

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