供应某种 FITC标识球蛋白的利用工艺

1.配制易溶于0.1M碳酸钠缓解液( pH 9.0 )的待标志血清氢氧化钠溶液,氧化还原电位≥2mg/ml.

2 )消融FITC于无水DMSO配成成1mg/ml的液体。

3 )这对于1ml蛋白酶悬浊液加入到50μFITC饱和溶液,可可以依照两遍5μ的量边加边缓缓的搅匀蛋清悬浊液;

4 )待的需求FITC下载终止,将生理反应液于4°C阴凉孵育8h ;

5 )加如NH4CI使其终密度至50mM , 4°C暂停化学反应2h ;

6)建立二甲苯青至质量浓度0.1% ,甘油至密度5% ;

7 )凭借尺寸大小钻孔大小最合适的凝露过滤器层析分开祛除未被搭配的FITC ,分开比率在20,000至50,000 (球蛋白质列如 抵抗能力)。待抑菌凝胶柱动平衡机后,将大于影响搭配波从柱顶灌入，

另存凝胶的作用柱,待其大部分注入柱床后,加如PBS降低液。

这个时候,也可以构成几条带: a,尽快位移带,也就是说FITC-蛋白质记号物,先被过柱,一般来说于内光下可观察到; b,慢速移动手机带,也便是未紧密联系淀粉酶的FITC和二=甲苯青。只有在PBS缓存数据液冲洗后被过柱出了。

8 )于4°C背光吸收可以达到偶联物,加如0.1% ( w/v )叠氮化钠成为-种抗腐蚀剂。若蛋白酶密度较低( < 1mg/ml) , 能加入1%BSA当作-种蛋白酶稳定性剂。

9)标上物中荧光素和球蛋白的指数值( F/P )可使用测得495nm和280nm处的吸光值来鉴定费, F/P应处于0.3-1.0。小于等于该比重则数字信号太低，不低于该比重则底色太高。

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