萤火虫荧光素酶是个61kDa单亚基血清质,酶吸附性不需翻译专业后绘制(3,4)。往往，如若汉语翻译来完成即都具有隔代遗传行业报告基因组的技能。在ATP,Mg和 O现实存在下，顺利通过昆虫荧光素的硫化不起作用发出光量子(图1)。在过去反馈生活条件下，荧光素的钝化要经历过的荧光素-AMP当中体，转化非常的很快。毕竟，各种检验化工在底物和酶搅拌后生产有一种"闪动"光，并急剧衰减。当下，普洛麦格司在荣获专属的一定量检则萤火虫荧光素酶抗逆性的微生物培养基内加入了辅酶A(CoA)，能够变快酶转变(5)保证完善的发应推测力，以此获得加长的"辉光"荧光移动信号(图2)。
海肾荧光素酶是一种个36 kDa单亚基血清质，纯化自生态界收入的Renilla reniformis"%) ,有3%的碳水有机化合物。就如同萤火虫荧光素酶，海肾荧光素酶的活力性也不是想要翻譯后淡化，已经翻譯完工就行行驶遗传病检测结果基因组的实用功能。海肾荧光素酶合理利用Oz和腔肠荧光素(coelenterazine)催化氧化带光的反应(图1)。当软件DLR查重生物学使用时，海肾荧光素酶的化学反应的动结构力学生成辉光型荧光信息，并在衡量阶段中慢慢地衰减(图2)。
图1．由萤火虫和海肾荧光素酶所促使的生物体带光表现
图⒉用双荧光素酶上报基因遗传检侧生化试剂盒检侧到的萤火虫和海肾荧光素酶行成的荧光。
在DLR查测控制系统中，萤火虫和海肾荧光素酶的亲水性会从同裂解液中分刘海步估测的。在完毕萤火虫荧光素酶亲水性("實驗"报告单遗传基因)的在测量后，萤火虫荧光被迅速的淬灭，并走过同时缴活海肾荧光素酶的荧光表现("相较比较”统计染色体的可溶性)。故此，DLR测量程序整合了3个测量电学，对来源于转染生殖细胞系裂解液或无生殖细胞系转录/译为表现总共同体现的三个报告书遗传基因迅猛地可以提供降钙素原检测成果。
萤火虫荧光素酶测试的线形面积展开达酶浓度值的8数目数量级,可测试≤lfg(大致需要10摩尔)的调查报告模板什么是基因酶(图3A)。用双荧光素酶报告书遗传基因监测软件系统，海肾荧光素酶的波形空间达酶浓硫酸浓度的7最大数重量级，参考统计基因组酶查测的限度≤10fg(一般在3×101摩尔)(图3B)。还有就是，这多个酶表演的特女性朋友吸附性差不多。
用pGL3 -Control和pRL-SV40质粒载体DNA双方转染CHO肿瘤细胞(1×10°个生殖细胞/60mm培养计划).细胞核用PBS洗條后,加如400ul的 PLB并刮下血细胞，成裂解液。分成 20ul 的细胞核裂解液，并将其和100ul的荧光素酶检则生化试剂II(LARII)混后，直接用荧光发光字广告计精确测量萤火虫荧光素酶的活力(绿线)。而后，在荧光出现发亮计试管上假如100ul的 Stop &GloTM化学试剂，以淬灭萤火虫荧光素酶表现，与此同时提高海肾荧光素酶表现，并再次在测量海肾荧光素酶的抗逆性(蓝线)。此进行实验用到Turner Designs型号规格20e荧光会发光计,能默契配合几台计算的机来示踪在12秒左右检则周期段内的荧光发射成功事情。
图3.萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶出现发亮影响的线性网络空间。
纯化的萤火虫和海肾荧光素酶经富含1mg/ml BSA的1xPLB缓冲区液多次稀释液。运行配备工控机的Turner Designs 荧光亮光计20e型，在经历过其中一个起始2秒的预读超时后，判断两者荧光素酶在各种类型不一密度时，在10十几秒内的总荧光。
图4.手去动运营的荧光有光计，或要装一枝化学制剂进样器的荧光有光计对其进行双荧光素酶检测工具的的办法。
若荧光夜光计配带好几个进样器，则将裂解的样品管理优先预包装到荧光夜光计的试管上，自后按次序自然加入到LuciferaseAssay Reagent II(LAR I)和 Stop & GloTM实验试剂。
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