标题：Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit

讲述：

Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酒曲单杂培植基），培养教育基以愈来愈非常方便利用的铝泊袋形态打包，每独力打包就能够制备0.5 L的培训基。安全使用时仅需用将袋中的其它干粉倒进去三角型瓶或培训瓶中，参与0.5 L的ddH2O，第三121 ℃高压蒸汽灭菌15 min就好。无须秤量和修整pH值。

实验操作材质：

发酵粉菌株：Y187（障碍dna型his3-200、trp1-901、leu2-3）

因素媒体：pHis2-DNA（选择标签Trp评估报告染色体His）

文库质粒：pGADT7-cDNA（筛分标示Leu）

实验设计布骤：

一、被转化因素膜蛋白

1. YPDA手机平板培养教育划线，活性Y187酵母粉菌枯草芽孢杆菌；挑酵母粉菌菌落于流体YPDA培育基摇菌培育；

2. 分离纯化感觉到态并将pHis2-DNA转化成到感受到态人体细胞；

3. SD/-Trp板式检则流量转化后果。

二、自启用加测

1. 制取不一样3-AT氧化还原电位等度的SD/-His/-Trp平板电脑苹果，3-AT的盐浓度一半设置在50-100 mM相互之间，并设置成因为没有含3-AT的参考；

2. 将作出流量转化货物稀释液到单克隆平均水平（OD值＜0.002），涂板。

3. 选择出特别适合的3-AT氧化还原电位。（如某氧化还原电位3-AT板式上的菌落弱小且稠密，与剖析不同于差异特别，且变长塑造时段就要会重复长，既为非常完美的3-AT质量浓度）

三、互作挑选

1. 药液SD/-Trp培养计划计划基培养计划计划鱼饵菌株Y187（pHis2-DNA），制得Y187（pHis2-DNA）大量态血细胞；

2. 将pGADT7-cDNA文库转户Y187（pHis2-DNA）大量态细胞系；

3. 导出生成物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-TrpiPad各一道，以便换算转成利用率；已用转成产品整个涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X为选择所得税率浓硫酸浓度）平面50块（φ150 mm），训练3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trpuv上克隆，PCR后（推介SK2420，菌P法），测序鉴定结论；

5. 点到点证实。

培养计划基专门配制方式方法：

1. 500克培植基干粉放到三角型瓶或培植瓶中，加0.5 L去化合物水面熔化分解（琼脂凉水不溶）。

2. 无变动pH值，121 ℃高电压无菌15 min。

3. 药液塑造基封好口闭光、制冷处理备用电源。

4. 胶体培训基散热到50 ℃范围倒扁平，环境温度凝胶的作用，封好倒放4 ℃同步保存。

3-AT的采用策略：

1.确定所用iPad的数据，专门配制培训基；

2.软件设置3-AT的密度系数；

3.消毒建立塑造基，待塑造基散热到55 ℃左右时间，按配置有机废气浓度成为3-AT母液，摇匀后倒板；

4.标签4个平板等的3-AT有机废气浓度，超净台蒸发凝胶的作用后，将被转化货物涂板，28-30 ℃的培养3-5天。

批售设备目录格式：

1/2MGY培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母，也称MGAs） 2×500ml

1/2MM培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母） 2×500ml

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

2×MDH培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

5×AP培养基/APD培养基（含葡萄糖，-Ura） 100mL×5

5×AP培养基/APG培养基（含半乳糖，-Ura） 100mL×5

APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMGY & BMMY基础培养基 10×0.5L

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

PAD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.1L

RDH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RDH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

YPD/YEPD培养基（用于毕赤酵母）（溶液） 2×500ml

YPD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MDA培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MD培养基 10×0.5L

毕赤酵母MD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGYH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGY平板 （9cm）10个

毕赤酵母MMH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MM平板 （9cm）10个

毕赤酵母PAD平板 （9cm）10个

毕赤酵母RDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母RDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母RD培养基 10×0.5L

毕赤酵母RD平板 （9cm）10个

毕赤酵母筛选培养基套装（PichiaPink表达系统） 1Set

刚果红YPD平板（9cm） 10块

缺精氨酸APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

yyp2021.2.22