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外泌体膜包载仿生前药纳米粒清除CTCs
发布时间:2021-02-04     作者:axc   分享到:

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外泌体是40-180 nm大小的细胞外囊泡,由各种类型的细胞广泛分泌,包括细胞,免疫细胞,干细胞和内皮细胞等。它们在长距离和短距离的细胞间通信中起着至关重要的作用。有研究在来源的外泌体膜中发现了各种特定的表面粘附分子,它们介导了对同源细胞的靶向,同时外泌体膜上高表达的CD47蛋白可以帮助外泌体逃脱巨噬细胞的吞噬作用。据我们所知,此前还没有外泌体膜包被仿生纳米颗粒靶向清除CTCs并转移的报道。外泌体膜修饰的策略可以帮助纳米粒子规避巨噬细胞的吞噬作用,并靶向原发,识别CTCs。

外泌体膜包载仿生前药纳米系统的制备与表征

利用单硫醚键将亚油酸与PTX偶联来备制ROS皮肤敏感的PTX前药(图1)。选择保湿乳液萃取剂化掉法将PTX-S-LA和CuB共承载到PEG-PCL納米级水粒子中,以备制PCNP,进来P提出PTX-S-LA,C提出CuB。之后将PCNP与EM孵育以想要高效率的获取到EMPC。差不多的工作技术备制对应承放有PTX-S-LA或CuB的EMP或EMC。下面2凸显了PCNP的液体干劲学截面积和结构,她们具条件的圆柱状样式,年均宽度将近80 nm。PTX-S-LA和CuB在PEG-PCL納米级颗料中的载药量对应为9 wt%和5 wt%,包封率对应为87.6%和69.2%。选用均值离心式法抽取外泌体。经过散发出电子厂高倍显微镜(TEM)显像实验设计外泌体的碟状节构,和专门针对特性性外泌体标注物TSG101,CD9和CD81的球核苷酸印痕定性分析,揭示外泌体已变功区分。EMPC是经过对抽取的外泌体参与低渗处里来分离纯化的。将PEG-PCLnm技术颗料与EM进一部孵育以分离纯化EMPC。经过消减的zeta电势差,不断增加的粒级(〜100 nm)和TEM图形材料PEG-PCLnm技术颗料外面上EM的成功的包被。

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考虑到捡查仿生设计学外泌体奈米颗料壳上膜高蛋清酶的具备,按己前的简报做出了12烷基盐酸钠高密度聚乙烯酰胺凝胶的效用电泳(SDS-PAGE)和高蛋清酶质印子应力测试。膜高蛋清酶标志的SDS-PAGE高蛋清酶捡查表达,在仿生设计学外泌体奈米颗料的高蛋清酶质谱中,选择了从EM续承的奇特高蛋清酶。CD44和CD47面对改变至关特别重要的。CD44是MDA-MB-231体生殖細胞系上的漆层吸附氧分子,在CTC与改变灶的吸附中起主要效用。CD47需要守护体生殖細胞系防止遭受巨噬体生殖細胞系的吞没效用,吞没效用与的侵蚀有关的。如图如图2D如图,她们相融于**体生殖細胞系膜和EM上,并在EMPC中保留较好,以介导同型**体生殖細胞系靶点。而后,用DiI(红色的)标上EM,用以香豆素6(C-6,绿色的)标上疏水重要,以檢查EM是完全合并PEG-PCL奈米颗料。将双标上的奈米颗料移除到MDA-MB-231体组织细胞中2 h,用以共准确把握脉冲光测试光学显微镜(CLSM)观测。如图是2E下图,DiI的荧光与C-6的荧光共追踪定位,意味着外泌体仿生设计奈米颗料在体组织细胞摄入几段用时后都可以留下构成齐全性。

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接下去来,自己理论研究了C-6图标的PEG-PCL納米顆粒肥料(C-6 NPs),C-6图标的红上皮组织核包被的PEG-PCL納米顆粒肥料(RM @ C-6 NPs)和C-6图标的在MDA-MB-231,MCF-7和NIH 3T3上皮组织中包被外泌体的納米顆粒肥料(EM @ C-6 NPs),以确定外泌体仿生学学納米顆粒肥料的同型**上皮组织靶向治疗药物效率。做出了红上皮组织核对PEG-PCL納米物体的表达语,以认可EM上的蛋清质在有助于MDA-MB-231上皮组织不确定性化的方面的主要目的。如同图甲中3A图甲中,C-6 NPs和RM @ C-6 NPs的C-6荧光比EM @ C-6 NPs的荧光低,这表述上皮组织摄食的挺高归因于外泌体上的蛋清质。指定,将MCF-7和NIH 3T3上皮组织设为弱阳性对应,这进三步介绍,用EM表达语納米顆粒肥料可很大开展指定来自**上皮组织的不确定性化。随后用流式的上皮组织仪检测工具靶向治疗药物目的的按量。如同图甲中3B图甲中,在MDA-MB-231上皮组织中,EM @ C-6 NP的荧光数据预警比C-6 NP和RM @ C-6 NP的荧光数据预警高3.5倍。差距一样,与C-6 NP和RM @ C-6 NP差距,EM @ C-6 NP在MCF-7和3T3上皮组织中未表示荧光开展。之上说到的很多结局表述,仿生学学外泌体納米顆粒肥料对同型**上皮组织兼备进行性吸引力。

QQ截图20210204105435.png然后,验证了外泌体上的CD47对巨噬细胞吞噬能力的作用。将接种于12孔板的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞与C-6 NP,RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NP孵育。如图4C所示,RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NPs表现出比C-6 NPs低得多的内在化。对于流式细胞仪定量分析,与RM @ C-6 NP和EM @ C-6 NP相比,C-6 NP的荧光强度增加了3.1倍。结果证实,RM和EM上的CD47均可巨噬细胞的吞噬作用。


结果:将ROS明感的单硫醚键拼接的紫杉醇-亚油酸前药(PTX-S-LA)和胡芦素B共同参与装封到PEG-PCL汇聚物中制法双载药胶束,相结一步一个脚印用肿瘤神经元ip产业的外泌体膜掩盖,制法外泌体样序贯产甲烷防生前药奈米级系统。该药中药制剂不只地靶向疗法药物原发,有时特喜欢的人捕捉清掉CTCs,故而**了转至。肿瘤神经元摄取量后,奈米级粒将**解发出胡芦素B,故而完成FAK / MMP数字信号通道调试**抑制**肿瘤神经元的体细胞转入,转入和侵蚀并转至。互相,解放的胡芦素B不断增加了肿瘤神经元中的ROS情况,级联有利于了PTX-S-LA前药的产甲烷,做到一石二鸟的效应。该药中药制剂表演出了很棒的CTCs靶向疗法药物程度、改善的前药产甲烷、延后的体里循环往复时期、多的蓄积和太深的瘤内侵入,在原位和异位MDA-MB-231建模 通常情况下表演出很棒的原发性和抗转至活性酶类。